新品体验 | 摆脱IP轻重链干扰，准确捕获互作蛋白！新品体验手慢无
转自：诺唯赞生物
IP/CoIP是研究蛋白互作的常用方法。其中免疫沉淀(Immunoprecipitation,IP)是一种利用固定在磁珠或琼脂糖树脂等固相支持物上的特异性抗体对抗原进行亲和纯化的方法。免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation,CoIP)是免疫沉淀的延伸，主要用于检测蛋白-蛋白之间的相互作用。
抗体是IP/CoIP实验中必不可少的试剂之一，它是由B淋巴细胞产生一种免疫球蛋白，形似一个“Y”，由4条多肽链组成。其中两条相同的重链和两条相同的轻链通过链内和链间的二硫键连接在一起，每条重链分子量大小约为55kDa，每条轻链分子量大小约为25kDa，如下图：
CoIP、IP实验过程中常常会碰到轻重链干扰的问题，尤其当靶蛋白与抗体轻链（25kDa左右）或者重链（55kDa左右）分子量接近时，导致IP-WB检测时无法准确锁定靶蛋白条带（如下图）。
在做IP实验时，抗体将靶蛋白富集下来，后续进行WB实验分析。但加入的IP抗体和IgG抗体在洗脱变性时被β-巯基乙醇和高温破坏了二硫键结构，抗体变性后断裂为游离的轻链（25kDa左右）、重链（55kDa左右），在后续WB实验中常规Anti-IgG(H+L)（H+L表示使用的免疫原就是抗体轻重链Heavychain+Lightchain）酶标二抗会同时识别原先的IP抗体和WB抗体，导致膜上至少出现三条不同的带，严重干扰最终的实验结果。如果靶蛋白条带也在55kDa或25kDa左右，常常和轻重链条带混淆在一起无法区分（见图3）。
诺唯赞空间构象特异性二抗RA1008，能有效解决IP实验轻重链干扰问题。
数据展示
诺唯赞空间构象特异性二抗RA1008，在WB检测中，不会与变性的IP一抗反应，消除了抗体的重链和轻链条带的干扰。
注：使用AktRabbitmAb免疫沉淀HeLa细胞的Akt,3条泳道分别为Input，IgG，Akt。以AktRabbitmAb作为一抗检测所有泳道；(图A)采用Vazyme构象二抗Anti-rabbitIgGforIP(HRP)#RA1008；(图B)采用普通二抗GoatAnti-RabbitIgGH&L(HRP)。
注：使用Caspase3RabbitmAb免疫沉淀HeLa细胞的Caspase3，2条泳道分别为Input，Caspase3。以Caspase3RabbitmAb作为一抗检测所有泳道；(图C)采用Vazyme构象二抗Anti-rabbitIgGforIP(HRP)#RA1008;(图D)采用普通二抗GoatAnti-RabbitIgGH&L(HRP)。
注：图A为空间构象二抗，清除轻重链干扰；图B为普通二抗，有重链和轻链干扰;图C为空间构象二抗，清除轻重链干扰；图D为普通二抗，有重链和轻链干扰。
申请指南
