和元生物获得发明专利授权:“一种提高大肠杆菌裂解过程中质粒稳定...
具体步骤如下:1)菌体重悬,所述重悬液含二糖类化学物质;2)碱裂解;3)中和;4)澄清;5)浓缩换液;6)分子筛层析;7)制剂换液。本发明的工艺简便,通过在菌体重悬液中添加一定浓度的二糖(如蔗糖、海藻糖等),保护大肠杆菌碱裂解过程中的超螺旋质粒,进而简化下游层析纯化工艺,并提高质粒回收率,方便快捷,适于推广应用。
Nature Catalysis丨合成甲基营养大肠杆菌用于甲醇的生物转化
将合成的甲基营养大肠杆菌用于将甲醇转化为价值更高的物质。研究方法1、连续稀释进化被用来提高甲基营养生长。2、基因组重测序菌落样本发现重复发生的突变。3、通量平衡分析(parsimoniousfluxbalanceanalysis;pFBA)用来预测长期适应性进化的大肠杆菌的通量平衡。4、蛋白的表达与纯化;体外酶活测定检测突变体酶的...
...安徽工程大学张琴教授等:过表达去饱和酶基因对大肠杆菌脂肪酸...
重组表达质粒pET-28a-de1、pET-28a-de2、pET-28a-de抽提纯化,分别采用限制性内切酶EcoRI/XhoI、BamHI/XhoI、BamHI/XhoI双酶切,琼脂糖凝胶电泳结果显示,各重组表达质粒酶切后均产生两条带(图2),其中大片段均与质粒pET-28a单酶切片段长度一致,小片段分别与de1、de2、de基因的目的片段长度一致,进一...
如何应对抗生素耐药性?借助反向疫苗学开发的新一代疫苗,或有意想...
重组蛋白,如在大肠杆菌中产生的重组蛋白,需要从粗裂解物的混合物中提纯,这一过程昂贵且耗时。亲和标签是特定的蛋白质或多肽,可以附着在重组蛋白的N-末端或C-末端,以帮助其纯化。一种常用的方法是将重组蛋白与谷胱甘肽S转移酶(GST)或多组氨酸(His)标签融合,通过亲和层析进行纯化。在大多数革兰氏阴性细菌(如大肠杆...
综述:细菌群落中抗菌药物耐药基因的水平转移
OMVs可以封装染色体和质粒的DNA片段及RNA,从而促进遗传物质的转移。OMVs可以吸收由自溶细胞释放的胞外DNA,或细菌可在OMVs脱落前将DNA打包进OMVs。已在大肠杆菌和鲍曼不动杆菌等物种中证明,OMVs可以进行DNA的水平转移,也可作为物种间DNA转移的手段。纳米管是细菌间的一种主要交流方式,提供了一个网络用于交换细胞内和...
mRNA疫苗超全知识汇总,看这一篇就够了!
一是RNA病毒感染性疾病,mRNA疫苗可用于传染性强、危害性大的RNA病毒感染性疾病的预防,如新冠病毒感染,目前已经在预防新冠病毒感染方面起到重要作用(www.e993.com)2024年11月19日。二是DNA病毒感染性疾病,mRNA疫苗可用于巨细胞病毒等DNA病毒感染性疾病的预防。三是mRNA疫苗还可用于链球菌和结核杆菌等细菌感染性疾病。
质粒转化大肠杆菌
1.重组质粒的鉴定。当质粒的重组或其它载体重组后,通常会发生质粒的重组失败,包括质粒的自身环化。因而要求进行筛选,把重组成功的质粒找出来。在目前常用的质粒和其它载体中含有相应的抗生素抗性基因,一旦重组成功,质粒环化(包括自身环化),抗生素抗性基因表达,被转化的大肠杆菌便具备抗相应抗生素的能力,可以含该抗生素的培...
科研| NAT COMMUN:代谢组和蛋白质组分析揭示了工程大肠杆菌糖酵解...
3-磷酸甘油脱氢酶1(GPD1)催化DHAP转化为3-磷酸甘油(甘油-P),随后3磷酸甘油水解酶2(GPP2)催化甘油-P去磷酸化并形成终产物甘油。本研究中,我们将能够表达编码gpd1和gpp2两个基因的、同时缺乏甘油激酶基因(glpK)来防止甘油被重新作为碳源而利用的质粒导入到大肠杆菌中,构建了能够产甘油的大肠杆菌菌株,并将其定义...
生物质粒的规模化发酵生产
转自:楚天人近年来随着基因/细胞治疗的突破以及mRNA疫苗的火热问世,对质粒的需求和大规模生产的要求愈发迫切,因此质粒的规模化生产显得尤为重要。质粒DNA通常是在上游生物工艺中由大肠杆菌在发酵系统中生产,一般支持病毒载体和mRNA疫苗制造的质粒生产规模都在几十升至上百升,进行高密度发酵,对发酵生产设备要求较高。大...
科研| 中国农大: 中国使用抗菌药物50年来,动物源大肠杆菌耐药基因...
这种减少可能是由以下因素介导的:(1)mcr介导的脂质A部分的靶向修饰是大肠杆菌中粘菌素抗性的唯一可转移机制,(2)mcr-1的表达可对携带含mcr质粒的大肠杆菌施加相当大的适应性成本,(3)禁止粘菌素作为生长促进剂显著降低了mcr-1的选择压力,(4)观察到mcr基因很少与其他ARGs一起出现在相同的可移动遗传元件上,这降低...