分子互作|蛋白与蛋白、核酸、小分子互作检测技术介绍、应用及资料...
DNA/RNAPulldown??原理DNA/RNAPulldown技术是通过生物素标记的DNA或者RNA探针先和Streptavidin琼脂糖珠/磁珠结合,再与细胞裂解液进行孵育,形成磁珠-核酸探针-蛋白复合物,再对蛋白进行洗脱和鉴定。??技术特点能够真实的反映细胞内蛋白质和核酸的结合情况;实验操作简单;不需要特殊仪器。??实验步骤1...
Cell主刊 | MST助力人体抑癌基因研究取得新发现!
为了寻找答案,研究人员进行了分子对接模拟及关键位点突变pull-down实验,采用质谱分析结合MST实验的方式,发现AARS1通过ATP依赖的方式催化形成乳酸-AMP中间体,随后将乳酸转移至目标蛋白的赖氨酸残基上,可实现共价结合。这一过程不仅在人类中,也在大肠杆菌中观察到,表明AARS1在物种间具有催化赖氨酸乳酸化的古老功能。
傻傻分不清?DNApull-down来啦!
DNApull-down实验首先针对靶标区域设计特异性DNA探针,探针经过脱硫生物素标记,跟偶联在磁珠上的链霉亲和素结合;细胞核提取物与磁珠-DNA探针孵育,作用蛋白质分子可以和DNA探针特异性结合;纯化出与靶DNA片段结合的蛋白复合体,经过洗涤可以将非特异性结合蛋白质去除;最后,经洗脱液洗脱,得到目的DNA探针-蛋白质复合物,再...
核酸蛋白互作:RNA/DNA pull down,CHIRP
常用于核酸与蛋白互作研究的技术包括:RNApulldown、DNApulldown、ChIRP、ChIP、reverse-ChIP、RIP等。其中,RNA/DNApulldown是研究体外条件下RNA或DNA与蛋白互作的重要技术。该技术通过体外转录目的RNA的一部分或全长,用生物素标记转录产物,再与链霉亲和素磁珠孵育使之固定在磁珠上,用以“pulldown”互作蛋...
惊了~RNApull-down的“小姐妹”RIP也来啦
在前面的《》一文中小编和大家一起学习了一种很有前景的研究RNA结合蛋白与其靶RNA之间互作的叫做RNApull-down的技术,后来经过系统的学习,我们发现研究RNA与蛋白互作还有一种比较常见的技术叫做RIP技术(RNABindingProteinImmunoprecipitationAssay,RNA结合蛋白免疫沉淀),堪称RNApull-down的姐妹。
PNAS|周政组与徐冬一组揭示EB病毒抑制宿主DNA损伤应答的新机制
研究人员首先解析了BKRF4组蛋白结合元件(HBD)与人H2A-H2B二聚体复合物的高精度晶体结构,同时利用核磁共振(NMR)、等温量热滴定(ITC)、pull-down等方法证明BKRF4-HBD通过"三元结合"模型与H2A-H2B二聚体相互作用(www.e993.com)2024年10月16日。在此基础上,研究人员通过单分子磁镊、凝胶迁移等实验证明,BKRF4-HBD特异识别并结合到半开放的核...
传说中的RNAPULLDOWN是啥?
实验使用的所有试剂耗材需经过去RNA酶处理2.RNApull-down一定要体外转录合成RNA探针吗不能基因合成吗?一般我们认为的基因合成是合成DNA双链,体外转录只是获得RNA的一种方式,相比化学合成纯度更高。所以pull-down实验一般是体外转录得到目的RNA。3.RNA在转录出来后,其OD一般都不高,可以使用吗?咋定量呢?
Nature子刊Oncogene:国自然热点之“外泌体糖基化”研究该如何开展...
使用细胞核交联(RIP)抽提试剂盒套件进行RIP。通过蛋白质印迹进一步证实结合的蛋白质,对免疫沉淀的RNA进行qRT-PCR分析。20.对接模拟、接触图和结合位点残基的鉴定NPDOCK服务器用于确定circSPIRE1与ELAVL1可能的相互作用。NPDOCKServer将GRAMM结合用于全局大分子对接、具有统计潜力的评分、聚类,然后从三个最大的集群中优...
来一场蛋白与蛋白间的“风花雪月”
实验一:OsMADS15与拟南芥AP1是高度同源的蛋白,是水稻中诱导开花的关键蛋白。OsFD1与拟南芥FD是功能相似的蛋白,可能是OsMADS15的转录因子。如下图,进行转录水平分析时发现,单独存在Hd3a和OsFD1都无法激活OsMADS15的表达,只有两者共存时才可以。图1Hd3a和OsFD1调控OsMADS15表达水平。实验二:GSTpull-down结果...