PNAS | 罗建沅/申占龙/纪建松团队合作揭示化疗药物耐药的新机制

利用蛋白免疫共沉淀,GSTpull-down,免疫荧光以及微量热泳动(MicroScaleThermophoresis,MST)等实验确证了LAMTOR1与cGAS之间存在相互作用,并且化疗药物诱导的双链DNA片段能增强两者的结合并促进LAMTOR1的表达。最后,通过基因沉默和过表达实验,确定了化疗药物诱导的cGAS蛋白降解是由LAMTOR1介导的。由于LAMTOR1并不是溶酶...

分子互作|蛋白与蛋白、核酸、小分子互作检测技术介绍、应用及资料...

DNA/RNAPulldown??原理DNA/RNAPulldown技术是通过生物素标记的DNA或者RNA探针先和Streptavidin琼脂糖珠/磁珠结合,再与细胞裂解液进行孵育,形成磁珠-核酸探针-蛋白复合物,再对蛋白进行洗脱和鉴定。??技术特点能够真实的反映细胞内蛋白质和核酸的结合情况;实验操作简单;不需要特殊仪器。??实验步骤1...

傻傻分不清?DNApull-down来啦!

DNApull-down实验首先针对靶标区域设计特异性DNA探针,探针经过脱硫生物素标记,跟偶联在磁珠上的链霉亲和素结合;细胞核提取物与磁珠-DNA探针孵育,作用蛋白质分子可以和DNA探针特异性结合;纯化出与靶DNA片段结合的蛋白复合体,经过洗涤可以将非特异性结合蛋白质去除;最后,经洗脱液洗脱,得到目的DNA探针-蛋白质复合物,再...

传说中的RNAPULLDOWN是啥?

RNApull-down是检测RNA结合蛋白与其靶RNA之间相互作用的主要实验手段之一。使用体外转录法标记生物素RNA探针,然后与胞浆蛋白提取液孵育,形成RNA-蛋白质复合物。该复合物可与链霉亲和素标记的磁珠结合,从而与孵育液中的其他成分分离。复合物洗脱后,通过westernblot实验检测特定的RNA结合蛋白是否与RNA相互作用。质谱实...

...海军军医大学杨彦勇/高福/蔡建明??发现同源重组介导的 DNA...

2021年7月5日,海军军医大学杨彦勇,高福及蔡建明共同通讯在MolecularCancer(IF=27.40)在线发表题为“Longnon-codingRNAANRILpromoteshomologousrecombination-mediatedDNArepairbymaintainingATRproteinstabilitytoenhancecancerresistance”的研究论文,该研究发现lncRNAANRIL通过介导DNA损伤的同源重组...

海量“大数据”挖掘,窥探肿瘤研究新思路

常用于核酸与蛋白互作研究的技术包括:凝胶电泳迁移率(EMSA)、RNA/DNApulldown、染色质免疫沉淀(ChIP),RNA结合蛋白免疫沉淀(RIP)、RNA纯化染色质分离技术(ChIRP)、酵母单杂交等(www.e993.com)2024年11月3日。默克作为表观遗传和信号通路研究领导者,覆盖从快速(MagnaCHIPkit)、高通量(HT96CHIP)、测序(CHIP-seq)、芯片(Unicersal...

专家论坛|袁正宏:HBV cccDNA转录代谢调控机制及沉默清除策略

其他技术手段包括多组学联合分析临床标本队列、以及结合传统的“Pull-down”、ChIP及蛋白质谱或基因测序技术鉴定特定蛋白-蛋白/DNA/RNA相互作用,可有利于寻找cccDNA特异性结合或转录调控因子。体外生化系统的建立也有助于加深对cccDNA生物学特性的了解及相关宿主因子鉴定。高通量化合物筛选靶向病毒蛋白HBx、HBc或直接靶向...