亲和层析填料的种类及其应用

GST亲和层析是利用GST融合蛋白与固定的谷胱甘肽（GSH）通过硫键共价结合，通过GSH竞争洗脱的原理来进行蛋白纯化[8]。GST亲和层析纯化蛋白的条件温和，可以保证蛋白的活性。3.MBP-tag亲和层析介质麦芽糖结合蛋白（MBP）有42.5KD大小，不含半胱氨酸（Cys），作为融合蛋白的标签，通常放在N端在大肠杆菌中进行表达。

蛋白表达纯化时如何选择标签?

3MBPMBP（麦芽糖结合蛋白）标签，是蛋白质纯化最常用的标签之一，也是大标签，分子量大小在40kDa以上，由大肠杆菌K12的malE基因编码。MBP可增加目标蛋白在细菌中的溶解性，尤其是真核蛋白，也可以增加融合蛋白表达量。MBP可以和交联淀粉亲和树脂结合，结合的融合蛋白可用10-20mM麦芽糖在温和条件下洗脱，得到高纯度、高...

融合型原肌球蛋白MBP-CTB-TM构建及其口服致敏性评价

MBP-CTB-EGFP融合蛋白确实可穿过HEK293T细胞的细胞膜进入到细胞内,说明MBP-CTB-EGFP在原核表达后仍具有作为黏膜佐剂的能力,从而促进外源蛋白进入细胞内。此外,通过与MBP-CTB-EGFP基因利用转染进入细胞相比,MBP-CTB-EGFP融合蛋白携带外源蛋白进入细胞的效率更高。5、融合蛋白MBP-CTB-TM对小鼠血清中TM特异性抗体的影响...

蛋白质影响草酸钙肾结石形成的机制探讨

此时使用市售蛋白质染料试剂(BioRadProteinAssayDyeReagent#5000006;Bio-Rad,Hercules,CA)测定每个样品中的蛋白质浓度,使用运行的Bio-TekPowerWaveXS读板器在595nm处检测吸光度Gen51.11软件。使用牛血清白蛋白作为标准对每个样品进行三次蛋白质测定。生成的PP储存在-80°C。在蛋白质结合实验...

蛋白质纯化(Protein purification)方法选择

蛋白质纯化(Proteinpurification)方法选择杨道理综述李保昌审校(济南军区总医院。山东济南250031)关键词蛋白质纯化方法选择随着分子生物学的发展,越来越多的科研人员熟练掌握了分子生物学的各种试验技术,并研制成套试剂盒,使基因克隆表达变得越来越容易lIl。但分子生物学的上游工作往往并非是最终目的,分子克隆...

科研狗专属福利,多款 Cytiva 标签蛋白填料免费试用!

1.适用于纯化麦芽糖结合蛋白,容易放大,高纯度浓度洗脱目标蛋白质,还能保护目标蛋白质的活性(www.e993.com)2024年11月15日。2.高结合载量≈10mg/ml填料,pH稳定性>7.0。识别下方二维码马上申请免费试用。实验结果展示:DextrinSepharoseHighPerformance的放大实验A.MBP2-β-galactosidase的放大纯化:a.MBPTrapHP1mL;b....

退退退!纯化实验八大常见问题,一文全给整明白了!

绝招四:纯化实验中常用的亲和标签汇总Cytiva提供多种亲和标签纯化产品,可用于纯化His、GST、Strep(II)/Twin-Strep、MBP这些标签融合的重组蛋白。不同的标签蛋白在分子量、促溶性、结合特异性等方面各有特点,个性鲜明。图2:Cytiva产品可用于纯化的主要亲和标签的性质对比...

照着文献里的方法做实验,竟然失败了|蛋白|缓冲液|蛋白酶|酶切|dna...

图3.使用PreScission蛋白酶进行柱下酶切(Off-columncleavage)与柱上酶切(On-columncleavage)的主要流程与对比(改编自[3])。更多关于标签蛋白纯化的故事和避坑指南,尽在「??爱纯派云课堂之纯化达人成长记」系列网络课程。点击「阅读阅文」报名后即可免费观看,快快来学习吧!

【科技前沿】何万中团队原创性开发可克隆电镜标记技术实现细胞中...

何万中研究组利用大肠杆菌表达纯化的GFPNanobody(GBP)与MT标记的融合蛋白GBP-MT,去免疫标记细胞中表达的GFP标记蛋白,展示出该技术可以广泛用来标记目前已有GFP标记的各种细胞及动物组织。相比基于抗体的传统免疫电镜标记技术,何万中研究组发明的此项基于遗传编码的可克隆电镜标记技术是对细胞电镜成像领域单...

重磅| 左建儒2篇Mol Cell文章,阐述NO的生物学功能

在蛋白质中,Cys可以存在三种形式,自由的巯基,二硫键及亚硝基硫酯,首先用化学物质MMTS使本来存在的巯基转化为甲基硫硫酯,然后使用抗坏血酸钠盐ascorbatesodium(Asc)还原亚硝基硫酯,使其成为游离的巯基,之后就是使用HPDP-生物素与经过处理过的蛋白质中的游离的巯基反应,偶连上生物素,最后通过亲和素来纯化...