生物素标记HpLV衣壳蛋白基因cDNA探针

设计引物:根据HpLV衣壳蛋白基因的全长序列设计特异性引物,这些引物可以是正义引物、反义引物或两者的双链形式。PCR扩增:利用设计的引物进行PCR扩增,获得目标基因的cDNA片段。生物素标记:将生物素分子通过共价连接等方式标记到PCR产物上,形成生物素标记的cDNA探针。三、应用与优势生物素标记HpLV衣壳蛋白基因cDNA探针...

Nature重磅综述 |关于RNA-seq,你想知道的都在这

ONTcDNA测序也可以测序全长转录本,而且适用于单细胞测序。同样使用模板置换逆转录来制备全长cDNA,在加接头制备测序文库之前,可以自己决定是否进行PCR扩增。DirectcDNA测序可消除PCR偏差,获得的测序结果质量更高;PCR扩增的cDNA文库的测序产出(测序获得的reads数)更高,适用于样本中RNA含量较少的情况。而目前还未在ONT...

PCR反应的几大要素(各组分和条件)

来源比较广,用于复制的PCR模板可以是任何DNA来源,如基因组DNA(gDNA)、互补DNA(cDNA)和质粒DNA。不过,DNA的组成或复杂度会影响PCR扩增的最佳起始量。例如,在起始量为50??L的PCR中,只需0.1–1ng质粒DNA,而gDNA则需要5–50ng。最佳模板起始量还取决于所使用的DNA聚合酶类型;经过改造的DNA聚合酶对模板...

无论你是“E人”或是“I人”,今天我们都是“P人”

整个反应过程分为两步,第一步是经反转录酶的作用,从RNA合成cDNA的过程;第二步是以cDNA为模板,在DNA聚合酶作用下扩增目的片段的过程。作为模板的RNA可以是总RNA、mRNA或体外转录的RNA产物。无论使用何种RNA,关键是确保RNA中无RNA酶和基因组DNA的污染。用于反转录的引物可视实验的具体情况选择随机引物、OligodT及...

一文读懂:PCR,qPCR,Real-time PCR,RT-PCR和RT-qPCR

该技术的一般过程为,首先以RNA为模板在反转录酶的作用下合成其对应cDNA,再以cDNA为模板通过PCR进行DNA扩增。归根结底,其就是在PCR过程前加了一个反转录过程,之后既可以进行普通PCR。RT-PCR技术灵敏且应用广泛,可用于检测细胞中基因表达水平,细胞中RNA病毒的含量和直接克隆特定基因的cDNA序列。

《自然·通讯》:免疫调节DNA水凝胶用于富集和传感肿瘤细胞抑制术...

如图3i所示,激光处理组细胞克隆率明显降低,为未处理组的49.45%(www.e993.com)2024年11月28日。综上所述,这些数据表明CPDH-Ce6@cAS的肿瘤细胞捕获能力有助于ATP检测和PDT治疗。图4:CPDH@cAS的体内肿瘤复发检测在验证cAS在细胞水平的感知活性后,作者探索了术后包埋CPDH@cAS是否可以通过局部肿瘤细胞富集和ATP响应的荧光"off-on"信号机制及时...

cDNA文库构建技术-cDNA链的反转合成

注:引物可为特异引物(构建特异文库)、olig0(dt)15引物或6核苷酸随机引物,但不同引物RT时温度不同,前两种在42℃下进行,而随机引物则在37℃下进行。构建cDNA文库是一种获得目标基因并进一步进行基因重组,基因克隆的重要方法,而在该文库构建中有mRNA逆转录出cDNA是一步极为关键的操作。mRNA的逆转录主要由MMLV、...

引物设计不求人!10 个小技巧,轻松搞定 PCR

一、最好在模板cDNA的保守区内设计引物DNA序列的保守区是通过物种间相似序列的比较而确定的,在NCBI上搜索不同物种的同一基因,通过序列分析软件(比如DNAman比对Alignment),各基因相同的序列就是该基因的保守区。二、引物长度一般在15-30碱基之间...

科研| mSphere:中东呼吸综合征 (MERS) 冠状病毒与重症MERS患者微...

1使用从MERS-CoV感染细胞中纯化的总RNA的引物验证和扩增产物的生成为了评估所选引物在受控条件下扩增病毒RNA的效用,从感染复数(MOI)为5的MERS-CoVEMC株感染的MRC-5细胞中纯化总RNA。该RNA用作模板以使用随机六聚体启动cDNA合成。扩增条件见表1;MERS-CoV基因组使用30-扩增子(图2A)、15-扩增子(图2B)或8-...

NGS文库构建的关键酶!

在二链合成时,RNaseH可以除去RNA-DNA杂合链中的RNA链,配合DNA聚合酶Ⅰ(YeasenCat#12903)催化合成cDNA第二链。DNA聚合酶Ⅰ具有5'→3'DNA聚合酶活性,可在模板和引物的作用下,沿5′→3′方向合成与cDNA一链互补的序列。后续流程分别为末端修复、3'端加“A”、接头连接、PCR富集,这些在DNA文库构建中...