如何使用移液枪移取氯仿与注意事项

当然,在实验室中进行操作时,若移液器受到氯仿侵蚀的话,这往往会使我们难以持续获得可靠的结果。因此,最好的做法还是使用选择结果可靠且易于保持清洁的移液器来取氯仿,例如耐化学腐蚀的赛多利斯Proline??Plus移液器。这样可以避免有机溶剂对移液枪的潜在腐蚀,并且可以减少有机溶剂的挥发,从而提高实验安全性。三、...

干货| 酶切实验切开 or 切不开,真的是玄学吗?

??模板制备过程中使用到乙醇、氯仿、苯酚、SDS、EDTA等,残留在DNA模板中,会不同程度影响酶的活性,可将DNA过柱纯化。??PCR中参与扩增反应的DNA聚合酶具有外切酶活性,可能会影响酶切产物末端完整性,进而影响克隆效率,建议使用PCR纯化后的产物。2.内切酶识别的DNA位点上的碱基被甲基化或存在其它修饰??甲基...

PCR反应的几大要素(各组分和条件)|摩尔|扩增|引物|pcr|聚合酶|dna...

SDS的主要功能是:溶解细胞膜上的脂类与蛋白质,因而溶解膜蛋白而破坏细胞膜,并解离细胞中的核蛋白,SDS还能与蛋白质结合而沉淀;蛋白酶K能水解消化蛋白质,特别是与DNA结合的组蛋白,再用有机溶剂酚与氯仿抽提掉蛋白质和其它细胞组分,用乙醇或异丙醇沉淀核酸。提取的核酸即可作为模板用于PCR反应。一般临床检测标本,可采...

植物基因组DNA及总RNA提取技术

如果试材较老、多糖含量高,在提取缓冲液中应提高??-巯基乙醇的用量,且在用氯仿/异戊醇抽提之前先用酚:氯仿:异戊醇抽提一遍,这样去除蛋白较为彻底。所得DNA应为无色或灰白色,若呈褐色则有多酚类物质污染;对多糖含量高的材料,提取液中CTAB的浓度可增至3%或更高。琼脂糖电泳检测DNA:制作1%的琼脂糖凝胶,吸...

上新| CUT&Tag、CUT&RUN双来袭,让你更快hold住蛋白质与DNA互作!

包含DNA提取模块,告别酚氯仿抽提。??产品性能好:常/异染色质无差别切割,实验结果更真实。??结果更准确:含有Spike-in组分,校正组间差异。??区分下游实验:可建库可qPCR,满足不同实验需求。02Vazyme#HD10102Vazyme#HD101性能展示...

专访谭高翼丨华东理工团队开发高效克隆放线菌大片段DNA方法,获得...

谭高翼介绍道,GC含量高会导致体外DNA操作困难,GC的高频出现会产生大量重复或相似的DNA序列,致使DNA重组或片段组装时易出现错配(www.e993.com)2024年11月18日。另外,GC含量高的DNA在PCR时需要更高的退火温度,这也会导致DNA扩增失败或碱基出错等问题。此外,由于实验室一般用的酚、氯仿等化学试剂提取的DNA由于技术原因易...

高通量测序之RNA提取那点事~~

组织匀浆后加氯仿分相时,因TRIzol试剂pH<5.2,则DNA优先分配于有机相,水相则是RNA,组织蛋白以及部分核蛋白+大片段基因组变性以沉淀形式形成中间相。3.不同沉淀剂的作用原理及应用异丙醇沉淀原理是降低了介电常数,破坏了了核酸分子表面的水化层。另外还可以利用等电点法和盐析法沉淀,如利用醋酸钠(3M,pH5.2)...

拍击式无菌均质器提取DNA的实验操作案例分享

5.提取DNA:破碎完成后,将破碎液转移至离心管中,加入适量的酚氯仿-异戊醇进行有机抽提,再加入氯仿-异戊醇进行第二次抽提。6.DNA沉淀:将上清液转移至新的离心管中,加入适量的无水乙醇沉淀DNA。7.DNA清洗:将沉淀的DNA进行清洗,去除其中的盐分和杂质。

卢煜明因无创检测获拉斯克奖,距离诺奖还远吗?

那个时候,DNA提取的技术还不成熟,所以卢煜明的做法是,先把血浆或血清加热,使蛋白灭活,因为这些蛋白如果有活性的话可能会降解DNA或者影响PCR的活性。接下来,最高速度离心,把变性的蛋白沉淀下来。最后,直接吸取上清,用里面的DNA做PCR。卢煜明用自创的“土方法”完成了提取过程,而今天的方法一般是酚氯仿法或者DNA亲和...

【前沿科普】染色质可及性:探索功能基因组的窗口

基因组DNA通过交联剂甲醛共价结合到染色质蛋白质上,利用超声波将染色质剪切成碎片,苯酚-氯仿抽取后,缠绕有DNA的核小体分布于两相交界处,而无核小体的DNA则分布于水相中。对水相中的DNA进行测序分析,就可以确定开放染色质区域。04ATAC-seq使用了一个预先装载DNA接头的Tn5转座酶,旨在对基因组进行酶切的同时标记...