PCR反应的几大要素(各组分和条件)|摩尔|扩增|引物|pcr|聚合酶|dna...

dNTP储存液:dNTP溶于pH为7.0的NaOH贮存液中,最初的贮存液可稀释到10mol/L,分装后存放在-20℃冰箱中。dNTP使用浓度在20～200μmol/L之间。4种dNTP必须等浓度配合以减少错配误差。dNTP使用浓度:在PCR反应中,使用低dNTP浓度,可减少非靶位置启动和延伸时的核苷酸错误掺入。在常见的PCR应用中,各种dNTP的常用终...

质粒DNA的提取纯化、限制性酶切及电泳检测

使用限制性内切酶时应尽量减少其离开冰箱的时间,以免活性降低。(3)混匀反应体系后,将离心管置于浮子(或插在泡沫塑料板上),37℃水浴保温2-3小时,使酶切反应完全。(4)每管加入10倍的上样缓冲液,充分混匀以停止反应,置于冰箱中保存备用。2.2琼脂糖凝胶的制备及DNA电泳检测(1)取50×TAE缓冲液20mL...

PCR实验室入门级知识点,你真的掌握了吗?

2-8℃冰箱、-20℃或-80℃冰箱。高速离心机。混匀器。水浴箱或加热模块。微量加样器(覆盖0.2-1000??l)。生物安全柜。03扩增区(3区)功能:cDNA合成、DNA扩增及检测。必备物品:核酸扩增仪(或荧光定量PCR仪)04扩增产物分析区(4区)功能:扩增片段的进一步分析测定,如杂交、酶切电泳、变性高...

杨倩┃米根霉α-淀粉酶保守区域组氨酸突变及功能性质

PCR产物经胶回收、纯化处理后使用SalI和NotI进行双酶切并与采用同样酶切方式的质粒pKLAC1相连接并转化大肠杆菌,重组质粒经酶切和序列测定验证正确后使用SacII线性化并利用电穿孔转化法导入K.lactis,重组酵母经YCBA培养基筛选和分离纯化后分别点种活性筛选培养基,于30℃静置培养48h后使用卢戈氏碘液染色,出现透明圈的...

干货:分子生物学常见问题解答

样品取材后应该迅速置于液氮中冷冻存放,然后转移到-70℃冰箱存放。如果未经液氮速冷直接转移到-70℃冰箱存放,会造成RNA缓慢降解。样品研磨后,在液氮刚刚挥发完时,将样品迅速转移到含裂解液的容器中,立即混匀匀浆。4)外源RNA酶的污染:试剂、器械等实验用品应该采用DEPC水灭菌处理。