和元生物获得发明专利授权:“一种提高大肠杆菌裂解过程中质粒稳定...

具体步骤如下:1)菌体重悬,所述重悬液含二糖类化学物质;2)碱裂解;3)中和;4)澄清;5)浓缩换液;6)分子筛层析;7)制剂换液。本发明的工艺简便,通过在菌体重悬液中添加一定浓度的二糖(如蔗糖、海藻糖等),保护大肠杆菌碱裂解过程中的超螺旋质粒,进而简化下游层析纯化工艺,并提高质粒回收率,方便快捷,适于推广应用。

pCMV-N-Flag-BioID2 (邻近蛋白生物素标记质粒)

这种技术的主要步骤包括:构建质粒:将生物素标记序列克隆进质粒中,通常使用特定的克隆技术(如PCR扩增和限制性内切酶切割)。表达和标记:转化表达宿主细胞,如大肠杆菌(E.coli),进行蛋白表达,并利用生物素标记的标记剂标记邻近蛋白。应用:用于分析蛋白质与其他生物分子(如蛋白质、RNA或DNA)之间的相互作用,例如通过近...

“双非”高校,唯一单位发Nature Sustainability!|活性|催化剂|...

工程大肠杆菌细胞的合成和检测作者使用大肠杆菌细胞来进行研究,因为它们含有具有电催化ORR活性的膜间细胞色素c蛋白。为了提高细胞色素c的浓度和细胞外界面电子转移效率,作者采用了基因和纳米工程手段。将含有编码cytc蛋白的torY基因的质粒转入野生型(WT)细胞,以获得工程型(ET)细胞(图1)。在质粒中,强T7启动子导致ET...

大肠杆菌质粒DNA的提取和质粒DNA琼脂糖凝胶电泳鉴定

一、大肠杆菌质粒DNA的提取质粒DNA的提取是从事基因工程工作中的一项基本实验技术,但提取方法有很多种,以下介绍一种最常用的方法:碱裂解法:此方法适用于小量质粒DNA的提取,提取的质粒DNA可直接用于酶切、PCR扩增、银染序列分析。方法如下:1、接1%含质粒的大肠杆菌一、大肠杆菌质粒DNA的提取质粒DNA的提取是从...

HUST-China战队:大肠杆菌的蜕变—从致病祸首到合成生物学帮手丨...

为了让所选择的基因在底盘生物中表达,科学家们还需借助一个叫做“质粒”的小帮手。质粒是细菌等微生物的细胞质中一小段环状的DNA分子,具有能自主复制且稳定表达其上所携带的遗传物质的特性[4]。图9.质粒模型科学家们先将自己所设计的基因连到质粒上,再将质粒导入进大肠杆菌里,便成功构建出了研究模板。之后...

科研| 中国农大: 中国使用抗菌药物50年来,动物源大肠杆菌耐药基因...

这种减少可能是由以下因素介导的:(1)mcr介导的脂质A部分的靶向修饰是大肠杆菌中粘菌素抗性的唯一可转移机制,(2)mcr-1的表达可对携带含mcr质粒的大肠杆菌施加相当大的适应性成本,(3)禁止粘菌素作为生长促进剂显著降低了mcr-1的选择压力,(4)观察到mcr基因很少与其他ARGs一起出现在相同的可移动遗传元件上,这降低...

猪伪狂犬病毒gB基因在大肠杆菌中的分段表达

本研究表明,用大肠杆菌表达的不同片段的gB抗原均能与猪伪狂犬阳性血清反应。以gB-4和gB-5重组抗原建立的ELISA方法与IDEXX公司的gBELISA试剂盒符合率均为81.8%。但是限于检测样品的数量较少,抗原评价可能存在差异。仍需扩大检测样品数量,进一步评估鉴定。

生物质粒的规模化发酵生产

转自:楚天人近年来随着基因/细胞治疗的突破以及mRNA疫苗的火热问世,对质粒的需求和大规模生产的要求愈发迫切,因此质粒的规模化生产显得尤为重要。质粒DNA通常是在上游生物工艺中由大肠杆菌在发酵系统中生产,一般支持病毒载体和mRNA疫苗制造的质粒生产规模都在几十升至上百升,进行高密度发酵,对发酵生产设备要求较高。大...

超螺旋质粒DNA纯化方案 (高质量高纯度质粒的制备)

质粒DNA基因治疗药物是以质粒DNA为载体的基因治疗产品，一般选择大肠杆菌作为宿主细胞，提取出的质粒中DNA会以多种形式出现：超螺旋质粒DNA(scDNA)、开环DNA(ocDNA)、线性DNA和质粒DNA聚集体等。另外，还伴随有宿主蛋白(HCP)、宿主核酸(HCD)、RNA、内毒素等杂质。其中超螺旋质粒DNA（scDNA）是我们的...

江南大学团队改造大肠杆菌生物合成藻蓝胆素达147.0 mg/L

江南大学团队改造大肠杆菌生物合成藻蓝胆素达147.0mg/L,前体,底物,菌株,蓝胆素,血红素,复合物,江南大学,大肠杆菌,生物合成藻