动物药如何研究?南中医if7+: 水牛角蛋白富含巯基的肽协同调节Nrf2...
布洛芬(10mg/kg)和WBHK(38.8和77.5mg/kg)在给药0.5小时后显著降低了直肠温度(P<0.01,P<0.01,P<0.001,图2D),这证明了WBHK在降低LPS诱导发热大鼠的发热方面是有效的。此外,WBHK-H(77.5mg/kg)在给药1小时、2.5小时和3小时后可显著降低直肠温度(图2B、C和2E)。图2布洛芬(10mg/kg)和WBHK(38.8和77.5m...
WB 条带还能「找黄牛」,200 元一套,导师:你试下就可以退学了
将样本与加载缓冲液按1:1比例混合将混合后的样本在沸水浴中煮沸5分钟,这个步骤可以确保蛋白质的变性。煮沸过程中,SDS-蛋白质复合物的形成更加均匀,有助于蛋白质在凝胶中的一致性迁移。煮沸后立即将样品置于冰上冷却,这一步是为了终止变性过程,防止蛋白质在高温下过度降解或重新聚集。加载缓冲液的成分:0....
顿悟瞬间,照我这样做 WB,完美条带原图直出!
??洗膜过度:(洗膜时间不宜过长,加入的去垢剂不宜过强或过多,建议使用0.1%的弱去垢剂Tween-20)??目的蛋白含量过低:(适当增加样本上样量)??抗体活性低或稀释比例不合适:(选择验证过有效且妥善保存的抗体,合理稀释抗体使用量)??一抗与二抗不匹配:(针对一抗种属选择正确的二抗)问题二:目的蛋白...
【文末互动送礼】关于Biacore你最关心的问题-精选篇
③如果购买商品化蛋白,一般SDS-PADE,WB、Elisa鉴定过的蛋白,做Biacore基本没问题。但不排除蛋白自身的特性,导致结果和预期不符。(推荐使用脱盐柱PD-10(货号17085101)对配体蛋白进行换液,去除Tris等成分干扰,但需要与蛋白生产厂家确认去除原有Buffer后是否影响活性)(2)如果小分子不好溶解,可以使用DMSO或者乙醇等...
导师暴走!竟拿出祖传 IP/CoIP 实验 protocol,附异常条带分析
原因:IP变性洗脱时,抗体在高温和还原剂的作用下,会变性形成轻链和重链。改进:换用IP/CoIP专用的构象二抗(仅识别目的蛋白,不识别轻重链)如Vazyme#RA1008和RA1009;在IP和WB时,使用不同种属的一抗(需要购买两种抗体);WB用直标一抗(无二抗信号放大,可能产生信号弱或曝不出的情况)。
3步!小分子量蛋白,跑出漂亮 WB
抗体活性降低:选择在有效期内的抗体,工作液现配现用,避免长时间放置(www.e993.com)2024年9月7日。封闭过度:减少封闭剂的量或缩短时间;换用不同封闭剂类型。曝光时间过短:延长曝光时间。HRP抑制剂:所用溶液和容器中避免含有叠氮化钠。以上就是小分子蛋白WB经验分享以及排查方式,更多内容可进入丁香实验小程序进行排查。
崩溃!磷酸化蛋白 WB 太难了,踩坑无数后我总结了这 7 条
时间:5月5日16:00~17:00主题:Westernblot(WB)面面观:技术要点及解决方案●第四期时间:5月12日16:00~17:00主题:Luminex蛋白多因子检测技术:原理、流程及应用●第五期时间:5月19日16:00~17:00主题:3D培养和类器官实验技巧及常见问题...
【BLT小课堂】蛋白归一化在Western Blot中的应用
在WB中的偏差通常来自蛋白样本浓度不均、凝胶上样不一致或转膜不完全。这些不一致性可以通过凝胶和膜的可见光或荧光标记法监控,用泳道总蛋白或内参蛋白(比如GAPDH、β-tubulin、β-actin或cyclophilinB)进行归一化校正,来保证实验结果的可靠性。那么泳道总蛋白校正和内参蛋白校正有什么不同呢?
不藏了!WB 终极技巧:得此十一条,可稳条带!
半干转印功率及时间设置使用高电场转印可获得更高的转印效率,但是一定要注意系统的散热能力,避免凝胶过热。转印期间,「三明治」温度升高会导致电阻变化,进而引发转印效率不均一,缓冲液失去缓冲能力,甚至凝胶融化。半干转印在电流下降接近为零时,延长转印时间不会增加转印效果。
天能VE-586丨Western Blot蛋白免疫印迹常见问题
5)检测时曝光时间过长——减少曝光时间。6)二抗与封闭剂非特异性结合或反应——设置二抗对照(不加一抗)。7)一抗或二抗与封闭剂有交叉反应——在孵育和洗涤液中加入温和去污剂如吐温-20。脱脂奶粉含有酪蛋白,该蛋白本身就是一种磷酸化蛋白,会结合磷酸化特异性抗体而易产生高背景。使用BSA代替奶粉作...