【小优细节君】组织磷酸化蛋白很难做?细节要注意
这里介绍一篇宝藏文章,作者做了大量WB实验,还有多项对照,证明了死后间隔时间PMI(Post-mortemInterval)对磷酸化蛋白的影响。研究指出,小鼠被处死后,组织中磷酸化蛋白质迅速发生改变。心脏、肝脏、肾脏这几种组织中的大部分磷酸化蛋白在死后20s到10min的时间内迅速去磷酸化。例如Tau在Thr212的磷酸化以及GSK-3β在Ser9...
中药多组学策略发1区: 天津中医大以代谢组学和转录组学揭示金芪...
我们利用WB和PCR检测小鼠肝脏中参与葡萄糖和脂质通路的靶点,结果显示高脂+STZ诱导的T2DM小鼠IRS-1表达降低,PI3K和AKT磷酸化水平降低,提示胰岛素信号水平降低;JQJT通过增加IRS-1表达和PI3K和AKT磷酸化水平,增加T2DM小鼠的胰岛素敏感性和胰岛素信号水平。糖脂代谢离不开胰岛素的作用,在肝脏中,胰岛素的主要作用是参与葡萄糖...
景杰生物酪氨酸磷酸化修饰组学2.0实现五大技术革新
为进一步满足对酪氨酸磷酸化研究的需求,杭州景杰生物科技股份有限公司(以下简称“景杰生物”)在2022年8月首次推出酪氨酸磷酸化修饰组学1.0的基础上,重磅推出“酪氨酸磷酸化修饰组学2.0”,实现五大技术革新:1、富集方法-独家重组单克隆抗体:相较于IMAC/TiO2及传统的泛抗体、SH2domain等富集方法,景杰生物PTMab抗体...
如何选择WB蛋白电泳封闭液?
据了解,市面上宣传无蛋白的快速封闭液有很多,但真正纯化学成分的WB封闭液并不多,研究者可使用像BIOG品牌的WB无蛋白快速化学封闭剂这类产品,组分是纯化学成分,不含任何蛋白质抗原成分,因此对于像磷酸化蛋白检测、一抗或二抗与牛奶、BSA存在交叉反应情况下的WB检测尤其适用,实验者也无需陷入封闭液选择的困扰。2、...
p38激酶在癌症研究中的进展(磷酸化抗体免费送)
p38磷酸化抗体验证数据RecombinantPhospho-p38MAPK(Thr180,Tyr182)Antibody,RabbitMonoclonal,Cat:110435-R0004WB应用:多肽竞争特异性验证Westernblotanalysisofextractsfromserum-starvedNIH-3T3,untreated(lineA);treatedwithUV(30min),withoutpeptide(lineB)orantigen-specif...
Actin 不灵了?PNAS 告诉你为什么做 WB 一定要跑双内参
Figure5:通过WB分析,研究人员揭示了在AMBRA1表达水平较低的黑色素瘤细胞中,FAK1信号通路的活化与BRAFi(一种MAPK抑制剂)的抗性有关(www.e993.com)2024年11月8日。WB结果显示,AMBRA1的缺失与FAK1的磷酸化水平增加相关联。这些Figure通过WB技术的应用,不仅证实了AMBRA1在黑色素瘤对MAPK抑制剂抗性中的作用,还揭示...
Food Funct | 黄冈师范学院李士明教授:苦瓜及其植物化学物质的...
从苦瓜野生变体WB24中纯化的野生苦瓜提取物对TNF-α处理的FL83B细胞也表现出降血糖作用,并以AMP活化蛋白激酶(AMPK)非依赖性的方式抑制IkB激酶(IKK)复合物和NF-κ。丁醇部位显著抑制NF-κBDNA结合活性,抑制p38、c-JunN-末端激酶(JNK)和ERK/MAPK的磷酸化,并以剂量依赖的方式降低p65(NF-κB亚基)和c-Fos(AP...
Western blot整膜和未裁剪膜长什么样还不清楚?
(1)GAPDH:甘油醛-3-磷酸脱氢酶,在糖酵解过程中将3-磷酸甘油醛进一步磷酸化的一个酶,其编码基因属于管家基因,广泛表达于各种细胞组织中,且表达相对稳定,故常常用来作为westernblot的内参。GAPDH会随着组织老化,表达水平发生变化,因此不适合在年龄差别很大的组织样本中作上样内参;缺氧时GAPDH聚集,表达上调,因此不能...
蛋白翻译后修饰(PTM)研究超全指南(下)
生化分析是利用靶蛋白的纯化或体外翻译来确定它是否可以被特异性的PTM修饰,将纯化的蛋白质、酶(如泛素连接酶)和适当的底物(如泛素)、辅因子等一起加入试管中,经过孵育再对样品进行WB分析。然而,体外生化分析并不适用于所有类型的PTM,它通常被作研究磷酸化8、泛素化9、SUMO化10和其他常规PTM。此外,进行体外生化分析...
EVTOP技术研究微升生物体液循环EV中的磷酸化蛋白质组特征
上图简要展示了该团队从微量体液中分离肠道病毒并原位富集磷酸化肽用于深度磷酸化蛋白质组图谱的研究方法。三、结果|创新点图2.关于EVTOP磁珠制备及EV分离的表征EVTOP设计充分利用了EV的双层磷脂层结构,包括自组装的疏水尾部和亲水性磷酸盐头部,并考虑了直接在珠上的样品的下游工艺。该方法特殊在:(I)磁珠被Ti...