基因工厂云探秘系列4-- 从PCR到基因组装:揭示合成关键步骤与精准...
常用的组装方法包括全片段酶促连接法和酶促填充法。全片段酶促连接法利用DNA连接酶将具有5'磷酸化且重叠互补的寡核苷酸片段连接形成双链DNA。酶促填充法基于聚合酶循环组装(PolymeraseCyclingAssembly,PCA)技术,使用DNA聚合酶将重叠的寡核苷酸延伸成双链片段,通过overlapPCR获取较长片段,然后将各片段一起组装至载体...
知识分享|一文了解实时荧光定量PCR(qPCR)技术的原理与分类
目前,根据所用荧光物质的化学原理和PCR检测的特异性,可将qPCR其分为两大类:第一类:DNA染料法荧光染料可以快速渗入DNA双链与之结合,发射荧光信号,而不掺入双链的荧光染料分子不会发射任何荧光信号,可以对特异性和非特异性的PCR扩增产物进行检测,例如SYBRGreenI和EvaGreen。DNA染料法第二类:荧光探针法...
转基因食品的检测方法
定性PCR转基因食品重组DNA的基本机构包括启动子、目的基因、终止子和标记基因。由于目的基因种类繁多,所以先用转基因食品最常用的转录启动子CaMV35S、转录终止子NOS及抗生素抗体基因NPTII三个序列来设计引物进行PCR反应,对结果阳性者可再检测目的基因。定量PCRPCR反应具有高度特异性和敏感性,但对实验技术的要求很高,其结果...
一分钟了解神奇的PCR技术
3.生物技术的其他应用除了在基因研究、基因克隆和基因诊断方面的应用外,PCR技术还被广泛应用于基因编辑、转录组研究、宏基因组研究等领域。例如,通过使用PCR技术,科学家们可以对特定的DNA片段进行高灵敏度的检测和扩增,从而实现对基因组的精细调控和研究。另外,PCR技术也广泛应用于物种鉴定、法医学鉴定等领域。4....
PCR检测可以用于哪些领域和疾病的诊断?
1.感染性疾病的诊断PCR检测可以用于多种感染性疾病的诊断,如乙肝、艾滋病、结核病等。这是因为这些疾病的病原体都含有特定的DNA或RNA序列,可以通过PCR检测出来。2.基因突变的检测PCR检测可以用于检测基因突变,例如BRCA1和BRCA2基因的突变与乳腺癌、卵巢癌等的关系密切。PCR检测可以定量检测这些基因的突变,从而评...
一文读懂:PCR,qPCR,Real-time PCR,RT-PCR和RT-qPCR
实时荧光定量PCR(Real-timePCR,QuantitativeReal-timePCR,qPCR),即第二代PCR技术,是指在整个扩增的过程中,引入了荧光染料或者荧光基团,随着DNA数量的成倍增加,反应体系中的荧光信号也会增强(www.e993.com)2024年10月1日。在整个PCR反应过程中,借助对荧光信号的强弱进行检测实时监测每一个循环中扩增产物量的变化,最后通过标准曲线和CT值对待...
...阅尔基因与 Bio-Rad 授权合作获进展,首个超灵敏多重数字 PCR...
近日,致力于生命科学研究和临床诊断产品的全球领先企业Bio-RadLaboratories,Inc.(以下简称Bio-Rad)上市了其首个超灵敏多重数字PCR检测产品。2022年,Bio-Rad与阅尔基因(NuProbeGlobal)达成了一项技术授权和产品开发协议,利用阅尔基因专利的抑制探针置换扩增(BDA)技术合作开发多重数字PCR试剂,本次新品发布...
气死!老板说做完克隆就放假,我两眼一睁就是 p,却颗粒无收
复孔重复性差可能是加样操作的问题;而基因克隆需要用高保真酶来确保扩增片段的准确性,常规的DNA聚合酶达不到这么高的要求。师姐可以试一下我最近免费申请的即用型超保真PCR预混试剂,使用时只需加入DNA模板和引物,最大限度地减少人为误差,而且可以确保扩增片段的准确性!
华大基因取得高特异性的碱基突变PCR检测方法专利,可以解决碱基...
专利摘要显示,本发明公开了一种高特异性的碱基突变PCR检测方法,包括:首先对模板DNA进行巢式PCR富集;然后使用无3’??5’外切酶活性且有焦磷酸解活性的DNA聚合酶,在焦磷酸盐存在的环境下,使用修饰引物进行PCR扩增,修饰引物在模板上对应的位置位于巢式PCR引物的内侧,其3’末端是双脱氧核苷酸,与待检测突变型模板互补而...
真的假的?构建质粒这些知道的越少,成功率越高
解决方法:在进行酶切前先纯化PCR片段,避免高盐离子浓度对酶的活性造成影响;使用随酶提供的推荐缓冲液;每μg的DNA至少使用3~5单位的酶;消化DNA1~2小时。从常见问题的解决方法不难看出,保证限制性内切酶正常发挥功能,可以避免很大一部分的阴性结果,实验技巧和试剂两手抓,一周搞定载体构建不是梦!实...