预制胶常见问题指南

控制上样量和浓度,避免过高导致不良影响。兼容性与溶解我们的预制胶兼容众多电泳槽,包括Bio-RadMini-PROTEAN,HoeferMightySmall,LifeTechnologyInvitrogen等,详情请见列表。Runningbuffer的溶解方法简单,只需用ddH2O溶解粉末至500ml即可。凝胶类型差异变性胶和非变性胶的主要区别在于是否含有SDS。变性胶在...

干货| 酶切实验切开 or 切不开,真的是玄学吗?

??部分限制性内切酶(如FokⅠ,TauⅠ)可能会与DNA结合,导致电泳时出现明显的凝胶迁移,使用含SDS的上样染料,加热使酶从切割的DNA上解离开。看完以上问题分析和经验分享,大家是不是对“玄学实验”多了一些信心呢?Vazyme提供SwiftCut快速限制性内切酶,5-15min准确完成DNA双链的切割,让分子克隆实验更便捷。快速...

SDS-PAGE检测蛋白纯度和分子量protocol

蛋白样品电泳前,需与上样缓冲液(LoadingBuffer)混合后煮沸处理,上样缓冲液中含有强还原剂(DTT或2-Me)和蛋白变性剂SDS,破坏了蛋白质的空间结构,将蛋白质解聚成多肽链,并将SDS包覆在肽链表面,SDS带的负电荷大大超过了蛋白原有的电荷量,使蛋白带有一致的负电荷(约2个氨基酸一个SDS)和一致的形状(棒状),消除了不...

蛋白质SDS-PAGE电泳与Western Blot

10%SDS100ml,10%过硫酸铵(APS)50ml,混匀后加入10mlTEMED,立即混匀,灌入垂直板中至短玻璃顶端,插入梳子,避免产生气泡,静置,约60分钟后,胶聚合,拔去梳子,用电极缓冲液冲洗加样孔,以去除未聚合的丙烯酰胺。

崩溃!磷酸化蛋白 WB 太难了,踩坑无数后我总结了这 7 条

03将样品储存在上样缓冲液(loadingbuffer)中蛋白定量后,将样品与上样缓冲液混合,遏制磷酸酶活性。随后可以将样本等分并储存在冰箱中或加载到凝胶上。04避免使用牛奶作为封闭剂牛奶中含有大量的一种磷蛋白——酪蛋白,会引起高背景。建议使用牛血清白蛋白BSA或无蛋白的封闭剂。

做WB 你最容易忽略的几个细节,我们找出来了

对于全细胞裂解,建议使用CellLysisBuffer(#9803)、RIPA缓冲液(#9806)或SDS上样缓冲液(#7722)(www.e993.com)2024年11月20日。CellLysisBuffer由于不含会使蛋白变性的强力去垢剂,仅含1%Triton,使其可在多种实验中被使用(如WB、IP)。RIPA缓冲液含有NP40和脱氧胆酸钠,变性能力更强,可以裂解细胞或者组织。SDS上样缓冲液也...