气死!老板说做完克隆就放假,我两眼一睁就是 p,却颗粒无收

师姐,我的暑假要泡汤了,老师安排做基因克隆实验,说做完就放假。我天天两眼一睁就是P,可不是复孔间重复性差,就是产物测序结果不准确,真的没办法了复孔重复性差可能是加样操作的问题;而基因克隆需要用高保真酶来确保扩增片段的准确性,常规的DNA聚合酶达不到这么高的要求。师姐可以试一下我最近免费申请的...

TA克隆的策略

对于只是想克隆保存或测序的同学来说,快速简便的TA克隆则不失为一个好选择。TA克隆的idea最初来自1994年。几位学者发现TaqDNA聚合酶会在PCR产物的3’末端加上一个脱氧腺苷(A),而且这种特性与模板无关。之后,Invitrogen公司发明了TA克隆技术,并拥有全球TAcloning商标的专利权,直至2013年。(这个就够...

除了常规的酶切连接外,你还了解其他的分子克隆技术吗?

TA克隆是指把PCR片段与一个具有3‘-T突出的载体DNA连接起来的方法。可用于不清楚目的基因的DNA序列,获得的目的片段通常需要通过TA克隆的方法重组到T-载体中,通过测序测定DNA序列。爱必信T-Vector快速克隆试剂盒(abs60085)是高效、便利的PCR产物克隆专用试剂盒。爱必信T-Vector快速克隆试剂盒(abs60085)产品特点:1...

NGS文库构建的关键酶!|片段|文库|测序|样本|末端|-健康界

在DNA文库构建过程中,TA克隆连接接头建库是目前商业技术中最常用的技术手段,主要建库流程如下:图2.Illumina平台DNA文库构建流程DNA片段化由于目前市场中测序仪的测序长度通常在150-500bp之间,因此需要使用机械打断或酶切打断的方法将大片段基因组DNA片段化为小片段的DNA。机械打断的方式对样本的损耗相对较高,操...

病例分析丨内分泌罕见病(五)_医学界-助力医生临床决策和职业成长

随后,对患者进行了VHL基因检测,在三个外显子中,VHL的1号及2号外显子无突变,3号外显子PCR产物直接测序发现在峰图150位置开始套峰,考虑此位置有插入缺失造成峰图移码,取PCR产物做TA克隆连接,挑选单克隆测序,发现克隆子A和E无突变,克隆子C存在一个剪辑缺失,经过序列比对,判定阅读框499位置,氨基酸167-168位置突变...

《食品科学》:老年人肠道乳酸菌的分离与鉴定及其来源发酵乳杆菌的...

对75株乳酸菌的菌体总DNA进行提取,以此为模板进行16SrRNA片段的PCR扩增,得到PCR产物的DNA片段长度约为1.5kb,符合细菌16SrRNA片段的大小(www.e993.com)2024年11月25日。对这些乳酸菌的PCR产物进行TA克隆与测序,将得到的DNA序列去除引物序列后,在NCBI数据库比对,并构建系统发育树,结果见图2。