PCR异常扩增曲线原因及案例分析

排除污染原因后复检样本,如果复检后曲线为阴性直线则说明之前的末尾起跳为非特异性扩增,如果复检后曲线仍与之前一致则说明末尾起跳表示该样本中待检病毒核酸的浓度偏低。异常曲线6:山域型曲线原因分析:严重的蒸发会呈现先上升后下降的曲线,轻微的蒸发会是一种缓慢的上升,这两类异常的曲线可以看一下检测后的反应...

大规模新冠核酸筛查中出现的异常扩增曲线分析

(1)第三方质控与扩增试剂不匹配;(2)错用不同品牌的质控品,扩增片段不同,与扩增试剂不匹配;(3)同一品牌不同批号的质控品混用,扩增片段可能存在批间差异;(4)质控品保存不当造成降解,或者处理不当造成基因片段浓度不均匀,如用前没有充分混匀。03解决方案:首先确认所使用的质控品是第三方质控品还是试剂盒自带...

qPCR结果异常原因分析及解决方案

原因分析:基因丰度较低。解决方法:增加循环数或者增加上样的模板量,或选择适用于低丰度模板的试剂盒。2.扩增曲线平台期下降原因分析:模板量过高及基线设置不当。解决方法:减小基线的终点值,一般情况下选择Ct-4;3.平台期锯齿状原因分析:RNA纯度低,杂质所造成的干扰;仪器需要校准;解决方法:增加稀释倍数优化...

PCR实验室空闲了,但是如何评估扩增效率还是要理清楚的

1)过低的扩增效率(<90%)图3:标准曲线E<90%。可能存在的原因:移液器校准不良或移液技术差。不正确的稀释导致标准曲线出现错误。染料浓度低荧光弱或者仪器未校准染料。引物设计不好或扩增子具有二级结构。标准曲线动态范围太小。Taq酶无活性或活性降低。样品抑制。2)过高的扩增效率(>110%)图4:...

特别关注|核苷(酸)类似物经治的慢性乙型肝炎患者低病毒血症的研究...

并且应对HBVDNA“未检测到”和“HBVDNA存在但低于检测下限”两种结果模式进行区分,后者表示有PCR扩增曲线和痕量DNA存在,只是无法准确定量。此外也应考虑过分片面地强调HBVDNA检测的灵敏度,会导致污染带来的低值阳性结果被误当作LLV,从而给CHB的诊治带来困扰[42]。

PCR实验连续失控!原因竟是这个...

我们从B扩增试剂出现失控现象开始,进行失控原因的查找,大致方向如下:1.扩增试剂:重新配置新的扩增试剂B,同个批次及不同批次的B试剂,排除因为原有的扩增试剂失效而造成的实验失控现象;2.实验操作:规范工作人员的操作步骤,排除因为操作不规范所造成的实验失控现象;同时实验中尽量多的使用B试剂进行实验,从更加规范...

生化结果为何出现负值!9大原因,7个处理高招教给你!

一些影响结果的主要原因1、灯泡老化或质量问题:部分生化分析仪是要求吸光度>19000或750小时需要更换。2、反应杯脏或者损坏:部分生化分析仪是要求与1号反应杯的吸光度差值<±800。3、清洗针堵塞或者漏气:反应液无法抽走或者无法添加清洗液进行清洗;也有的可能会在测试中滴水,反应液被稀释,造成吸光度突然下降,可能...

四大因素叠加:为何无症状感染者比例少,感染者症状强烈!

不管是先感染奥密克戎，还是流感，都会使人体抵抗力下降，另外的病毒、细菌也就会趁虚而入，也就是合并感染。虽说奥密克戎以攻击上呼吸道为主，但在冬季感染后会导致免疫力下降，流感病毒也有可能进一步攻击，导致症状变得严重，甚至引起肺部感染。来看下日本最近公布的新冠病毒死亡率情况，冬季死亡率是夏季的3-4倍左右...