你做质粒提取实验时,是否也遇到了这些常见问题?

l菌种活性不佳:如菌种保存时间过久,质粒可能丢失,建议培养前先划线活化,以稳定产量;如大肠杆菌太陈旧(低温下长期保存的菌等),建议重新涂板培养后挑选新菌落进行液体培养;l未充分裂解细菌:细菌需充分重悬,成团的细菌会因无法裂解降低产量;l裂解时间过长;l质粒本身拷贝数低。载体因拷贝数差异会造成质粒产量明显...

和元生物获得发明专利授权:“一种提高大肠杆菌裂解过程中质粒稳定...

具体步骤如下:1)菌体重悬,所述重悬液含二糖类化学物质;2)碱裂解;3)中和;4)澄清;5)浓缩换液;6)分子筛层析;7)制剂换液。本发明的工艺简便,通过在菌体重悬液中添加一定浓度的二糖(如蔗糖、海藻糖等),保护大肠杆菌碱裂解过程中的超螺旋质粒,进而简化下游层析纯化工艺,并提高质粒回收率,方便快捷,适于推广应用。

...安徽工程大学张琴教授等:过表达去饱和酶基因对大肠杆菌脂肪酸...

《食品科学》:安徽工程大学张琴教授等:过表达去饱和酶基因对大肠杆菌脂肪酸合成的影响脂肪酸去饱和酶代表一类氧依赖性酶,在脂肪酸不同位置引入双键,将饱和脂肪酸降饱和为不饱和脂肪酸,催化脱饱和反应,从而产生单不饱和脂肪酸和多不饱和脂肪酸。作为脂肪酸合成途径中的关键酶参与脂肪酸的合成,对微生物脂肪酸双键位置...

颠覆大肠杆菌地位?创新微生物引领合成生物实验新潮流

为了生成大量的蛋白质变体以供测试,研究者经常将这些质粒导入大肠杆菌细胞内,促使其复制出感兴趣蛋白质。然而,这种方法存在一个明显的短板:那些携带质粒载体的大肠杆菌,特别是那些经过改良的实验菌株,它们的生存能力相对较弱。而且,如果没有适当的压力维持(例如抗生素),质粒会随着时间的推移逐渐丢失,这无疑给菌株的维...

...利用纳米孔测序技术首次在蔬菜中发现新型多重耐药质粒

目前已经发现59种NDM酶,其中NDM-5是大肠杆菌中最主要的NDM酶。blaNDM-5基因可以被多种质粒介导转移,其中IncX3型质粒是最重要的传播载体,而blaNDM-5阳性多重耐药IncHI2型质粒的出现,进一步促进了blaNDM-5基因在不同生态位菌株中的传播。新鲜蔬菜被认为是耐药基因(Antibiotic-ResistantGenes,ARGs)重要的“储存库”。

...烯类抗生素的质粒竟能在革兰氏阴性菌和阳性菌之间广泛地来回穿梭

在研究的最后,周顺桂团队还测试了革兰氏阴性菌(大肠杆菌)是否能从革兰氏阳性菌那里“讨回”耐药质粒(www.e993.com)2024年11月19日。他们选择了横跨6个属的40种从大肠杆菌那里获得pX3_NDM-5质粒的细菌,然后将这些细菌与大肠杆菌共培养,发现其中35种细菌能把耐药质粒还给大肠杆菌,粪肠球菌就是转移频率最高的几种细菌之一。

《食品科学》:天津科技大学范晓光教授等:代谢工程改造大肠杆菌...

)W3110作为出发菌株,设计模块化代谢改造策略。研究通过基因组编辑和组成型质粒表达方式,构建1株遗传背景清晰、无营养缺陷、无需诱导的大肠杆菌基因工程菌,以期实现NAM为前体发酵生产-NMN。1减少底盘细胞对前体和产物的额外消耗NAM是-NMN合成的重要前体,大肠杆菌中...

2024合成生物学竞赛常规赛队伍专题之Antibiotic-free团队丨无抗...

图4:质粒的组成科学家就是把这个小东西导入工程菌。图5:大肠杆菌中的DNA与质粒这些工程菌为人类生产着重要的药物如胰岛素,还有细胞因子、抗体、疫苗、激素等,为我们解决了诸多难题。然而,在生产过程中人们需要持续使用抗生素作为生存压力,避免工程菌质粒的丢失。这将导致抗生素污染日益严重,质粒上抗性基因的水平传播...

一个划时代的里程碑

而mRNA的生产方式目前则更加适合大规模生产:直接将批量将病毒DNA转进质粒中,将质粒导入大肠杆菌,然后培养扩增大肠杆菌,只需要四天的培养发酵,然后就可以分解大肠杆菌,分离纯化获得DNA,然后再经过人工转录的过程,将DNA变成RNA,转录的过程只需要数小时。最后也是非常关键的技术壁垒:将mRNA加入与脂质纳米粒(LNP)结合,使其...

mRNA疫苗超全知识汇总,看这一篇就够了!

该载体病毒携基因片段进入人体,就能够诱导免疫反应的发生;核酸疫苗又称基因疫苗,包括DNA疫苗和mRNA疫苗,核酸疫苗是将决定病毒或细菌免疫原性的遗传物质直接导入人体,依靠人体自身细胞来产生抗原,并激活免疫系统产生免疫应答,两者的区别是DNA是先转录成mRNA再进行抗原蛋白质的合成,mRNA则是直接合成,目前在研的新冠疫苗大多...