qPCR结果异常原因分析及解决方案
原因分析:基因丰度较低。解决方法:增加循环数或者增加上样的模板量,或选择适用于低丰度模板的试剂盒。2.扩增曲线平台期下降原因分析:模板量过高及基线设置不当。解决方法:减小基线的终点值,一般情况下选择Ct-4;3.平台期锯齿状原因分析:RNA纯度低,杂质所造成的干扰;仪器需要校准;解决方法:增加稀释倍数优化...
别再出问题!这里有你 P 不出条带的全部原因
高灵敏度:基因组模板用量可低至1ng。操作简便:只需加入模板和引物,轻松配好体系,PCR产物平末端,纯化后可直接用于无缝克隆。HighFidelity&Sensitivity以下为真实有效的实验案例向上滑动查看更多案例1不同的酶保真性比较采用KP213和市场主流产品扩增4kbDNA片段(35个循环),产物用TIANGENPCR-...
干货| CT值大原因速查,qPCR 实验优化三步走
非特异性扩增消耗引物和Taq酶,会降低引物与目标基因结合概率,从而影响扩增效率。优化方式引物符合引物设计原则,避免出现非特异性扩增,注意引物扩增效率需在90%-110%之间;引物扩增效率的计算将基因扩增产物进行梯度稀释(至少三个梯度)同时进行qPCR,得到的CT值仪器会自动拟合标准曲线,或将CT值导入Excel中...
来了!新冠肺炎假阴性四大原因
具体因素包括:样本质量差,比如口咽等部位的呼吸道样本;样本收集的过早或过晚;没有正确保存、运输和处理样本;技术本身存在的原因,如病毒变异、PCR抑制等。近日在广东省人民政府新闻办公室举行发布会上,国家卫健委高级别专家组组长、中国工程院院士钟南山也表示,用核酸检测确诊是正确的,但还要看取材,绝大多数采样是取...
PCR假阴性的原因分析
造成PCR假阴性的原因是复杂的,也是多样的。主要有:1、PCR仪本身的质量问题PCR仪设计原理上的差异和经常出现的质量问题(如:温控不准等)给临床带来了诸如非特异性扩增(假阳性)、扩增效率下降(假阴性)等问题。2、离心机问题离心机的质量或使用不正确,造成离心标本模板没有分离出来造成假阴性,窃以为这是最易被忽...
姿势不对,实验白费!qPCR 十跑九跪的原因找到了
平台值高:对于表达量较低或模板量少的体系更容易扩增出来,且荧光值易于检测,扩增曲线的平台值更高特异性好:添加了特异性优化因子,降低引物二聚体出现的概率,使得扩增结果更可信全平台通用:特殊参比的ROX染料,适用于多种qPCR仪器,无需在不同仪器上调整ROX浓度...
如何解析新冠核酸检测中的异常扩增曲线?
原因分析:(1)模板污染导致降解,或者样本浓度低、加样量不准确导致扩增效率低。(2)模板浓度太高,或者存在抑制成分。(3)荧光染料浓度低,或者仪器问题荧光收集异常。(4)Taq酶无活性或活性降低。(5)试剂配制没充分混匀,分装不均匀。解决方案:
诺唯赞2022年年度董事会经营评述
在使用上述产品时,可根据需求提前将引物探针和试剂预混在一起,检测时只需加入样本DNA或RNA即可开始扩增,可显著减少反应配置时间,提高检测通量,解决下游客户操作繁琐、效率低、污染风险高的应用痛点。②高通量测序试剂/原料–甲基化解决方案在高通量测序试剂领域,为满足下游肿瘤诊断与治疗领域客户针对检测时间与灵敏度...
肺炎支原体大年,这些重点内容检验人需要掌握!
(2)PCR检测误差,虽然核酸扩增技术有特异性强、灵敏和快速的优点,但也不可忽略样品中存在PCR抑制物、试剂制备和反应条件不理想、靶DNA提取效率低下等造成假阴性的情况。感染MP后可不出现症状但持续携带,这会造成假阳性的结果。核酸扩增DNA检测并不能区分携带者与感染者、急性感染者与恢复期患者,单纯依赖PCR检测有可能...
qPCR体系优化和常见问题分析
过低的扩增效率(<90%)可能存在的原因:??移液器校准不良或移液技术差。??不正确的稀释导致标准曲线出现错误。??引物设计不好或扩增子具有二级结构。??标准曲线动态范围太小。??Taq酶无活性或活性降低。??样品抑制。过高的扩增效率(>110%)可能存在的原因:...