猫麻疹病毒SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法的建立
以10倍倍比稀释的重组质粒标准品作为模板进行荧光定量RT-PCR反应,将得到的Ct值作为纵坐标,模板起始拷贝数的对数为横坐标绘制标准曲线(图1A),获得的标准曲线方程为y=-3.1299x+31.947,相关系数R2=0.9949,扩增效率E=108.6%。溶解曲线温度为80.45℃,且为单一峰(图1B)。表明无非特异性扩增和引物二聚...
华大基因取得高特异性的碱基突变PCR检测方法专利,可以解决碱基...
在焦磷酸盐存在的环境下,使用修饰引物进行PCR扩增,修饰引物在模板上对应的位置位于巢式PCR引物的内侧,其3’末端是双脱氧核苷酸,与待检测突变型模板互补而不与正常野生型模板互补,DNA聚合酶依赖模板而焦磷酸解修饰引物的3’末端的双脱氧核苷酸,引物
分析qPCR 数据,竟被导师冤枉在实验室「炒股」
2)荧光定量PCR常用名词概念扩增曲线:qPCR过程中,以循环数为横坐标,以荧光强度为纵坐标,以反应过程中实时荧光信号所做的曲线。▲应为平滑的S型扩增曲线,阳性结果(科研)理想的CT值范围:1535;技术重复之间的CT差异<0.5。熔解曲线:指随温度升高DNA的双螺旋结构解链程度的曲线。分析该曲线...
Ta预判了我的预判?盘点那些SDUers的精准预判...
在做荧光定量PCR时,不同的溶解曲线验证扩增产物的特异性。要是溶解曲线是单峰,说明产物只有一条,结果较好;要是双峰,说明产物不特异,可能存在引物二聚体或非特异性扩增,有可能是引物设计有问题。通过在做实验前广泛查阅文献,发现实验结果大都符合预期,所选择的引物都具有特异性,可进行后续定量分析。因此,在我看来,之...
揭开“内标”未出之谜|pcr|内标|扩增|核酸|荧光|试剂_手机网易网
本次实验之所以会认为内标基因未出,和我们分子室日常工作习惯也很有关系,一般情况下我们观察的曲线为仪器数据优化处理后的扩增曲线,而非原始荧光曲线。优化处理后的扩增曲线为PCR扩增仪对实时监测到荧光信号进行平滑处理、去除噪声和异常值等操作,通过对这些数据优化处理,可以使得扩增曲线更加平滑、清晰,更容易进行分析和...
华大基因基因测序技术又一突破:基于测序数据的碱基突变检测专利
修饰引物的特殊设计使其能够在模板DNA上特定位点进行特异性结合,并通过实时荧光定量PCR记录扩增曲线,从而准确检测Ct值差异,区分突变型与野生型模板(www.e993.com)2024年10月23日。这一创新不仅解决了传统PCR检测中的难题,还使得低频突变的检测变得更为高效和可靠。应用前景:拓宽基因测序的应用领域...
一文揽尽:荧光定量PCR扩增曲线哪个阶段最重要
如图所示,标准的扩增曲线是呈现S型的。曲线是否符合标准,不仅跟样本起始量、qPCR体系配制、反应程序等相关,更依赖于一套高品质的实时荧光定量PCR系统。对于实时荧光定量PCR系统来说,高度检测灵敏度、高度重复性和高度稳定性,是每一台qPCR仪的追求。高性能的AzureCielo??实时荧光定量PCR系统完全符合以上要求,该系统...
收藏!PCR异常扩增曲线分析攻略
引起这样的原因是由于选用的耗材、试剂或者操作的原因导致背景荧光信号有所波动,从而造成反应孔的自动基线扣除错误。图二:基线自动扣除错误,导致扩增曲线抬升2确定耗材及仪器配件是否使用正确耗材对于荧光定量PCR来说比较重要,很多异常的扩增曲线是由于耗材使用不当引起的。常见的耗材相关问题包括:...
大规模新冠核酸筛查中出现的异常扩增曲线分析
曲线呈现出不典型的“S”型,有极短的对数扩增上升期,后进入平台期,荧光强度高于阈值,但远低于正常扩增曲线荧光强度,多见于顶部采光的PCR仪。02原因分析:该类型曲线可能为使用的PCR反应板封膜在PCR过程中受到水蒸气的影响产生变形,引起“光学扭曲”现象;也有可能是反应液中有气泡,气泡可以让光路发生折射,在气泡...
食品中多种动物源性成分检测实时荧光PCR法(BJS 201904)解读
出现非特异扩增,可能原因包括:一是荧光通道选择不正确;二是探针荧光基团选择有误;三是实时荧光PCR反应过程设置有误;四是引物探针异常;五是阳性对照DNA质量不符合要求;六是实时荧光试剂异常。注意阴性或空白对照出现扩增曲线。当阴性或空白对照出现扩增曲线时,表明检测过程存在DNA污染,此时应立即停止检测工作,并评价是否...