“阴差样错”了,怎么剖新析“肝”?|乙肝|iu|核酸|扩增|hbv|dna...
可排除核酸提取效率过低或丢失、标本中含有抑制物(血红素﹑脂血﹑胆红素等)﹑扩增仪孔间温度的差异等原因造成的结果假阴性。前两次检测,样本检测靶标从开始循环就出现明显荧光信号,考虑因样本中HBVDNA浓度过高造成的假阴性。实时荧光PCR通常包括基线期﹑指数期﹑线性期﹑平台期四个时期,前两次检测因扩增反应曲线没有...
拜qPCR 所赐,我成功跻身实验室第一显眼包
A3:1.由于基线校正不恰当。确认设置的基线校正范围的参数,按仪器说明书要求重新设定再进行解析。2.使用的模板量过多,扩增曲线过早起峰,使基线校正不能正常进行。当扩增曲线在10Cycles以内起峰时,要将模板稀释100~1,000倍后使用。Q4:如何选择制作标准曲线的标准品?A4:为了保持与实际检测样品间的扩增...
PCR异常扩增曲线原因及案例分析
耗材对于荧光定量PCR来说比较重要,很多异常的扩增曲线是由于耗材使用不当引起的。常见的耗材相关问题包括:1)错误使用成普通PCR仪器所对应的耗材普通PCR耗材一般透光度比较差,会造成荧光扩增曲线异常,比如打折的扩增曲线(图三)。图三:错误使用普通PCR耗材的结果2)未选择跟仪器加热模块规格匹配的耗材荧光定量PCR...
大规模新冠核酸筛查中出现的异常扩增曲线分析
仪器的自动基线设定为6-12循环,因样本病毒核酸载量高,扩增曲线起跳早,位于或早于基线循环处,导致曲线异常。3解决方案:该类型曲线需手动调整基线范围,将基线设定前移至合适循环,重新分析。3小“S”型1曲线特点:曲线呈现出不典型的“S”型,有极短的对数扩增上升期,后进入平台期,荧光强度高于阈值,但远...
小曲线大学问-新冠核酸异常扩增曲线知多少?
曲线特点:软件默认基线设定的扩增曲线呈波浪型,导致Ct值偏大,可能会被误判为阴性。原因分析:软件默认基线设定不准确造成扩增曲线异常。解决方案:根据检测试剂的要求设定适宜的基线。03软件优化造成的异常扩增曲线曲线特点:软件优化后扩增曲线向斜上方抬起,导致Ct减小,根据优化后扩增曲线会误判为阳性,但原始信号未有...
如何解析新冠核酸检测中的异常扩增曲线?
原因分析:(1)软件在进行基线自动扣除的时候出现错误,引起了扩增曲线抬升(www.e993.com)2024年9月9日。(2)选用的耗材、试剂或者操作的原因导致背景荧光信号有所波动,造成反应孔的自动基线扣除错误。(3)探针浓度过高,体系中有荧光物质污染,扩增效率低。解决方案:(1)采取手动调整基线的方法,重新定义基线即可正常(即将基线起点改为荧光信号稳...
一文揽尽:荧光定量PCR扩增曲线哪个阶段最重要
由于线性期和平台期的扩增产物已不再呈指数级的增加,PCR的产物量与初始模板量之间没有线性关系,所以也不能通过这两个阶段的PCR产物量计算出初始模板量。想要知道初始模板量的多少,还要依赖指数期的Cq值进行计算。▲图1.qPCR反应的重要阶段如图所示,标准的扩增曲线是呈现S型的。曲线是否符合标准,不仅跟样本起始...
qPCR扩增曲线的自述
三.扩增曲线末尾起跳,但没有完整扩增1.可能存在污染:建议对样本进行复检。2.如果是阴性对照,可能是引物二聚体或污染导致;如果是正常样本,说明浓度过低或者加样量不足。四.复孔重复性差1.加样误差导致:定期校准移液器;同时可先配制除模板以外的其他试剂的预混液,然后进行分装再加入模板,其次加大模板上...
荧光曲线异常太头疼?看了这篇文章你就懂啦
3.扩增曲线不增反降。可能是因为模板浓度过高,基线期内起峰,导致仪器将扩增曲线往基线位置下拉,导致扩增曲线越跑越低,不妨试试减少基线期循环数,可能会取得不错的效果哦。当然,以上所有的解决方法都建立在仪器没有出问题的基础上,要是尝试各种方法都解决不了,那么你就该物色物色新的PCR仪啦!实时荧光定量PCR仪,...
检验人,那些令人犯晕的PCR异常曲线这里都讲了!
按照原因分析进行一一核查,对症处理。背景知识判断扩增曲线是否良好的指标打开网易新闻查看精彩图片1.曲线拐点清楚,特别是低浓度样本指数期明显,扩增曲线整体平行性好,基线平而无上扬现象,低浓度样本扩增曲线指数期明显。2.曲线指数期斜率与扩增效率成正比,斜率越大扩增效率越高。