怎么获得一个基因质粒?
怎么获得一个基因质粒?很多人都绕不开质粒构建这个坎。自己构建基因,PCR扩增目的基因,提质粒,酶切链接加鉴定,整一套搞下来费时费力。新手也会出现PCR扩增不到目的基因的情况...所以稍微有点经费的实验室,建议考虑送出去做,找技术服务公司是快速获得一个基因质粒的好选择。因为本身不太贵,也能加快实验进度。
干货| 纯净无内毒,打赢细胞保卫战:揭秘质粒无内毒抽提的科学魔法
特殊吸附柱和精心研制的缓冲溶液,通过选择性吸附的方式与质粒结合,再配合专用的漂洗液,形成多重保障机制,大幅提高了内毒素的去除效率。除了科技我们还有“狠活”,这一系列产品的设计充分考虑实际操作体验,将内毒素去除步骤与上柱结合步骤二合一,只需一轮过柱,即可完成上柱。同时,我们优化了裂解液配方,添加颜色指示剂,...
质粒构建 | 从入门到精通
将连接产物加入感受态细胞,冰上放置30min、42°C热激转化或电转化,加入无抗性LB培养基,200rpm-37°C摇床摇45-60min后,涂至抗性或者其他筛选平板上,37°C培养过夜、挑取3-5单个克隆摇菌、菌落PCR或提取质粒后酶切鉴定、鉴定完毕后送质粒或菌液测序验证。转化及鉴定小贴士转化后克隆数量少?
城市环境所在质粒介导的抗生素抗性基因的环境扩散研究中获进展
长达75天的土壤培养试验中,荧光基因标记的质粒能在土壤中长期存留,并在培养初期即与土壤原生菌群发生了水平转移,且接合子菌种丰富,超过15个门。随着培养时间延长,质粒的转移效率增加,转移范围扩大。变形菌门在接合子中占绝对优势,同时质粒也水平转移到亲缘关系较远的菌种中。一些潜在病原菌如金黄色葡萄球菌在接合子中...
质粒提取的小技巧,请收藏!
现在用质粒提取试剂盒非常方便,而且菌体培养后,可以多管浓缩提取,提到的质粒量多,可以-20℃保存,以后用于酶切、转化等实验,可以提前跑个胶,只要不降解,就可以继续用,避免每次要用,都要培养一遍再提取一遍。1.质粒DNA提取提取质粒的时候,最后一步的酒精挥发很关键,基本上是其后续的酶切反应的决定性因素。所以...
Cytiva深度参与和元生物临港扩产计划 未来动辄百万元的细胞和基因...
而通过在本届进博会上的签约,Cytiva将助力和元生物在上海临港的扩产计划,利用FlexFactory整体解决方案合作建设2000L规模的一次性病毒悬浮培养平台和一次性质粒生产平台(www.e993.com)2024年10月23日。交付后的产线将为和元生物裸质粒、微环质粒和DNA疫苗等产品的临床应用打下坚实基础。预计2023年第一季度,和元生物将建成15条GMP基因治疗载体生产...
...而不是结束”,从这5个经典病例,看如何追溯支扩病因并针对性治疗
于是我们尝试构建小鼠质粒,现在小鼠已经孵育出来了,还在培育中。下一步准备进行小鼠的功能鉴定,一旦建立好小鼠模型,我们就可以尝试使用一些药物干预,如果发现G970D用现有的药物有效,那么就可以尝试开始病人的治疗方案。这是我认为中国CF患者的出路,但是遗憾的就是,除了G970D以外,中国人的大部分突变都是非常散发的,因此...
原位杂交实验(质粒制备和cRNA探针的标记)
一、质粒制备1质粒的转化和扩增1.1制备XL1-Blue感受态细菌1.取400uLXL1-Blue菌种加入到含200mlLB培养基的锥形瓶中,37℃、100rpm培养4h,离心,倒置,以冰冷的0.1mol/LCaCl_2重悬细菌,冰浴30min,离心,弃上清,倒置,再加4ml(含15%甘油)冰冷的CaCl2重悬细菌,分装(200μ/tube),-80℃保存。
质粒介导的抗生素抗性基因的环境扩散研究获进展
长达75天的土壤培养试验中,荧光基因标记的质粒能在土壤中长期存留,并在培养初期即与土壤原生菌群发生了水平转移,且接合子菌种丰富,超过15个门。随着培养时间延长,质粒的转移效率增加,转移范围扩大。变形菌门在接合子中占绝对优势,同时质粒也水平转移到亲缘关系较远的菌种中。一些潜在病原菌如金黄色葡萄球菌在接合子...
Cytiva深度参与和元生物临港扩产计划
而通过在本届进博会上的签约,Cytiva将助力和元生物在上海临港的扩产计划,利用FlexFactory整体解决方案合作建设2000L规模的一次性病毒悬浮培养平台和一次性质粒生产平台。交付后的产线将为和元生物裸质粒、微环质粒和DNA疫苗等产品的临床应用打下坚实基础。预计2023年第一季度,和元生物将建成15条GMP基因治疗载体生产线...