实验室超声波破碎仪(细胞粉碎机、裂解器)与雪花制冰机组合案例
去除杂质:通过酚-氯仿抽提、离心等方法去除蛋白质、多糖等杂质,得到较为纯净的DNA/RNA溶液。沉淀与洗涤:加入乙醇或异丙醇等沉淀剂使DNA/RNA沉淀,随后用70%乙醇洗涤沉淀以去除盐分和有机溶剂。溶解与保存:将洗涤后的DNA/RNA沉淀溶解在适量的无RNase水中,并保存在-80℃冰箱中以备后续使用。3.药物研发例子:...
实验安全 | 拒绝成为实验“耗材”,核酸提取“避毒”指南请查收~
TRIZOL是一种经典的总RNA抽提试剂,具有高样本兼容性。除了作为单一试剂使用,TRIZOL也可搭配自动化和核酸吸附柱,被广泛应用于RNA提取,虽然它不是直接的致癌物质,但主要成分为苯酚,且提取过程需要添加氯仿,因而也具有一定的危险性。Vazyme推出无需氯仿的“FreeZol”试剂,采用独特、无毒稀释液DBBuffer代替氯仿进行分层。...
服气!8 min 提完 RNA,不走一点弯路!
(2)样品匀浆化时加入足量的裂解试剂;(3)匀浆化后样品在室温下放置5min;(4)分离的水样层中杂含苯酚层,可加入氯仿把水相里参与的苯酚抽提掉;(5)RNA未完全溶解;最后步骤,需要简单干燥RNA沉淀(空气干燥或真空干燥5~10分钟),不要在真空管里离心干燥。问题二:提取的RNA浓度很低可能原因:(...
【醉翁之艺】血浆microRNA-221-3p可以作为非心脏手术后预测POCD的...
根据制造商的说明,使用TRIzolLS(Invitrogen,美国)从血浆样品中提取总RNA:在750μLTRIzolLS中加入250μL血浆样品,混合均匀后;加入200μL氯仿,混合均匀,12000g,4℃离心15分钟,然后取上清(上清液为含RNA的水相)转移至新EP管中,加入0.5mL异丙醇,混合均匀以沉淀RNA。将沉淀用1ml,75%乙醇洗涤两次,重悬于10–...
RNA提取又失败了,咋肥四?
DEPC是RNA酶的化学修饰剂,它和RNA酶的活性基团组氨酸的咪唑环反应而抑制酶活性。DEPC与氨/水溶液混合会产生致癌物,因而使用时需小心。试验所用试剂也可用DEPC处理,加入DEPC至0.1%浓度,然后剧烈振荡10分钟,再煮沸15分钟或高压灭菌以消除残存的DEPC,否则DEPC也能和腺嘌呤作用而破坏mRNA活性。
RNA的提取与提纯
注:TRIZOL的主要成分是苯酚(www.e993.com)2024年9月30日。苯酚的主要作用是裂解细胞,使细胞中的蛋白,核酸物质解聚得到释放。苯酚虽可有效地变性蛋白质,但不能完全抑制RNA酶活性,TRIzol中的8-羟基喹啉、异硫氰酸胍、β-巯基乙醇可以抑制内源和外源RNA酶。三、加入氯仿加入1/5体积Trizol的氯仿(CHCl3),我用了1mLTizol,因此这里加入了200μL的...
一秒破防,辛苦半天提的核酸,隔壁实验室 30 分钟就搞定了
磁珠法核酸提取原理:在磁珠法的反应体系中,核酸分子(DNA&RNA)会由线性压缩成球状,暴露出核酸骨架上大量的负电基团与反应体系中的阳离子连接,在磁珠最外层负电基团的作用下,形成「阴离子-阳离子-阴离子」的盐桥结构,使核酸分子被特异性地吸附到磁珠表面。而当反应缓冲液被弃除后,加入水性分子,会快速充分水化核...
高通量测序之RNA提取那点事~~
苯酚对蛋白质的变性作用远大于氯仿,但是酚的比重略比水重,碰到高浓度的盐溶液,离心后酚相会跑到上层,不利于含RNA的水相的回收;但加入氯仿后可以增加比重,使得酚/氯仿始终在下层,方便水相的回收;另外酚与水有很大的互溶性,如果单独用酚抽提,抽提后仍有大量的酚溶解到水相中,其会抑制后续的酶促反应,因此单独用酚...
用异硫氰酸胍(guanidinium isothiocyanate)和有机溶剂提取RNA
加2mol/L醋酸钠50ml,水饱和酚500ml和氯仿/异戊醇(49:1)100ml颠倒混合数秒钟,冰浴15分钟,4℃离心10,000r/min,15分钟,吸取上清,加入等体积异丙醇或2倍体积无水乙醇,4℃离心10,000r/min,10分钟,弃上清,70%酒精洗涤一次,抽干,加35mlDEPC处理水溶解,取5ml经稀释后紫外测定RNA提取量,其余30ml分装,...
惊了~RNApull-down的“小姐妹”RIP也来啦
这些非编码RNA在生命的生长发育的各个阶段都发挥着重要的调节作用,与白血病、糖尿病、艾滋病等多种病变密切相关,并且参与表观遗传学调控。而RNA-蛋白复合物驱动了几乎所有细胞过程的基因表达的转录后调控,包括剪接(splicing)、出核转运(nuclearexport)、mRNA稳定性以及蛋白转译过程,因此,对基因调控的了解就有赖于确定...