RNA的提取与提纯
加入氯仿后,上下翻转混均匀,室温下静置5分钟,12000g4℃离心15分钟,然后将上清液转移至新的EP管中(抽取过程要轻柔,避免将中间的白色沉淀抽入)。注:氯仿是良好的有机溶剂,可以将有机相和无机相分离,被trizol裂解的细胞各种结合了酚的蛋白质会被溶解在下层的有机相中,而RNA则在上层的无机相中。三、加入异丙醇...
高通量测序之RNA提取那点事~~
离心后酚相会跑到上层,不利于含RNA的水相的回收;但加入氯仿后可以增加比重,使得酚/氯仿始终在下层,方便水相的回收;另外酚与水有很大的互溶性,如果单独用酚抽提,抽提后仍有大量的酚溶解到水相中,其会抑制后续的酶促反应,因此单独用酚抽提后一定要用氯仿抽提一次将水相中的酚去除。
用假TRIzol 提 RNA 十几次后,怨种我总结了 5 大识别方法
Invitrogen??Phasemaker分层管(货号:A33248,A33249)可在TRIzol混合物样品的水相和有机相间形成一层牢固可靠的胶封,使科研人员能够轻松移取RNA相。RNA提取1.RNA沉淀:取尽上层水相,每1mLTRIzol试剂加0.5mL异丙醇。4℃孵育10分钟。4℃下12,000×g离心10分钟。此时底部的白色胶...
核酸提取纯化主要应用场景及解决方案!
分子诊断实验中经常会用到EDTA、肝素、柠檬酸盐抗凝剂和巴菲涂层制剂的血液样品及各种细胞组织,不同样本通常要用到不同的提取程序,甚至需要不同的试剂盒来完成。有时即使是使用同一个试剂盒,不同组分的使用量也不一样,常常出现一个试剂盒里由于个别组分已经用完导致整个试剂盒都废掉了的尴尬局面,导致了大量的试剂成...
RNA提取的操作步骤、注意事项和常见问题分析
1.从少量样品(1-10mg组织或102-104细胞)中提取RNA时可加入少许糖原以促进RNA沉淀。例如加800mlTRIzol匀浆样品,沉淀RNA前加5-10μgRNase-free糖原。糖原会与RNA一同沉淀出来,糖原浓度不高于4mg/ml是不影响第一链的合成,也不影响PCR反应。2.匀浆后加氯仿之前样品可以在-60至-70℃保存至少一个月。RNA沉淀可...
CTAB抽提液(RNase free)
从植物组织中制备基因组DNA较常采用的方法有氯化离心法、CTAB抽提法等(www.e993.com)2024年9月30日。CTAB抽提法是经典的植物DNA提取法,亦可用于提取多种不同类型植物样品RNA的提取,获得的量很高,但是纯度一般。CTAB抽提液(RNasefree)的有效成分为CTAB(十六烷基三乙基溴化铵),经RNasefree处理,临用前加入2-ME,使其更有效,更稳定。产品...
生化实验室15大常识_资讯中心_仪器信息网
由于不同构型的DNA在琼脂糖凝胶电泳中的迁移率不同,cccDNA的泳动速度最快,通过凝胶电泳方法可将不同构型的DNA区别开。3.用酚-氯仿抽提细胞基因组DNA时,通常要在酚-氯仿中加少许异戊醇,为什么?异戊醇可以降低表面张力,从而减少气泡产生。另外,异戊醇有助于分相,使离心后的上层含DNA的水相、中间的变性蛋白相及...
生化实验中常用有毒物质的危害与防护
3.RNA提取与有毒、有害溶剂“动物肝脏RNA的制备和纯度测定”是生物化学实验课中必开的基础实验,RNA的提取过程需要用到溶剂去除蛋白质,这些溶剂对人体具有一定的毒性。氯仿它对皮肤、眼睛、黏膜和呼吸道有刺激作用,是一种致癌剂,可损害肝和肾。它也易挥发,应避免吸入挥发的气体;操作时需戴合适的手套和安全眼...
果蝇RNA提取分离方法解析
从果蝇幼虫或成虫头中分离RNA似乎有点困难,主要是由于角质层的存在。角质层是一种保护性外骨骼,由不溶性胶原蛋白、糖蛋白和脂质等组成。虽然去除角质层可能需要一些力,但可以很容易地做到这一点,而且不会影响RNA的产量或纯度。提取RNA最主要的敌人是RNase(核糖核酸酶),它可能会悄悄消化掉所有的RNA。RNase是无处不...