讲透了!PCR 引物设计成功的秘诀,全在这里了(值得收藏)
2022年11月5日 - 网易
按照质粒构建的方法,在前后引物的5'端加上酶切序列(T4连接酶的方法)或15-20bp的载体酶切位点附近的载体序列(同源重组的方法),按照载体上的酶切序列编码情况,还需要在前引物ATG起始前加入碱基以免编码错位,以及确认后引物是否需要终止密码子。六、引物设计的注意事项1.注意正反向引物都是5‘-3’...
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双酶切和同源重组法构建载体
2018年11月2日 - 网易
采用同源重组法构建载体与常规双酶切构建载体方法不同。首先,设计引物时上游引物5’端前面加的是酶切位点(如HindIII)及该酶切位点在pMIRreporter载体中对应前面的15个碱基载体片段,下游引物5’端前面加的是HindIII酶切位点及该酶切位点在pMIRreporter载体中对应后面的15个碱基载体片段,如此设计引物是为了保...
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