Tris缓冲液中为什么要添加还原剂|乙醇|氧化|蛋白质|tris_网易订阅
在实验中,DTT的添加浓度通常为5~10mM,以确保还原剂浓度远远高于缓冲液中蛋白浓度,从而保护蛋白质免受氧化损伤。2、三(2-羧乙基)膦(TCEP)TCEP是一种硫醇类还原剂,在蛋白质化学及蛋白质组学研究中具有广泛应用。与DTT相比,TCEP不仅还原效率高,而且在某些巯基的交联反应中不需要祛除,使得实验过程更为简便。此外,...
Western Blotting--蛋白浓度测定
灵敏度极高,最低检测浓度为25μg/ml;在50-2000μg/ml范围内有良好的线性关系;兼容多大部分的裂解液,可以兼容高达5%的SDS,5%的TritonX-100,5%的Tween20、60、80、85等去垢剂;比Bradford法的蛋白间差异更少。受螯合剂和还原剂的影响,需确认EDTA低于10mM,无EGTA,DTT低于1mM,β-巯基乙醇低于0.01%;...
蛋白质浓度测定常用的三种方法
根据所测定的A595nm值,在标准曲线上查出其相当于标准蛋白的量,从而计算出未知样品的蛋白质浓度(mg/mL)。注意事项(1)在试剂加入后的5-20min内测定光吸收,因为在这段时间内颜色是最we定的。(2)测定中,蛋白-染料复合物会有少部分吸附于比色杯壁上,测定完后可用乙醇将蓝色的比色杯洗干净。(3)...
SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测蛋白大小、纯度及浓度
根据蛋白样品的大小制不同浓度的胶,蛋白分子量小就要制高浓度的胶,分子量大的蛋白就制低浓度的胶,制不同厚度的胶所需的浓缩胶和分离胶体积也不一样。5%浓缩胶:30%Acr-Bis1ml、A溶液1.5ml、无菌水3.5ml、APS75ul、TEMED10ul。12.5%分离胶:30%Acr-Bis5ml、B溶液3ml、无菌水3.9ml、APS...
蛋白质的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳原理、仪器试剂和操作步骤
蛋白质在十二烷基硫酸钠(SDS)和巯基乙醇的作用下,分子中的二硫键还原,氢键等打开,形成按1.4gSDS/1g蛋白质比例的SDS-蛋白质多肽复合物,该复合物带负电,故可在聚丙烯酰胺凝胶电泳中向正极迁移,且主要由于凝胶的分子筛作用,迁移速率与蛋白质的分子量大小有关,因此可以浓缩和分离蛋白质多肽。
吃凉皮中毒身亡:米酵菌酸中毒咋回事?
一旦摄入毒素,可先用20~50mL不等的10%活性炭来吸附和用碱性溶液清洗肠胃以增加分离度,减少肠道吸收,微囊活性炭血液灌流也具有吸附作用,一些抗氧化性药物如还原型谷胱甘肽、维生素E、巯基乙醇和触酶等都具有抗毒作用(www.e993.com)2024年10月22日。米酵菌酸的潜在应用1、米酵菌酸与肝癌...
王志珍:诺奖级科研成果在眼前却被忽略,奥秘何在?
牛胰核糖核酸酶A能够被高浓度尿素和还原剂??-巯基乙醇彻底地变性。还原剂打开了核糖核酸酶分子内部4对二硫键的共价连接,尿素破坏了维系蛋白质结构的疏水相互作用,从而将酶从其稳定结构变性为伸展的多肽链。蛋白质的结构是其活性和功能的前提,所以完全伸展的核糖核酸酶多肽链彻底丧失了催化活力。但是,当从反应体系中...
【健康】专家集体辟谣,大家别再相信了!
中国细胞生物学会教学与普及分会副会长、上海交通大学基础医学院教授易静说:“脱毛膏中含有巯基乙醇,它能破坏二硫键让蛋白质变性。这种成分如果口服肯定有害有毒,但如果只是将其短暂使用于皮肤的话,人体吸收的很少或基本不吸收,其毒性作用也许可以忽略。”可见,脱毛膏致癌的谣言是欠缺科学依据的,消费者不应盲目地将...
危险废物鉴别标准 毒性物质含量鉴别
6结果计算样品中目标物质的浓度(??g/L)以下式计算:样品中浓度(μg/L)=测定浓度(μg/ml)×萃取液体积(ml)水样体积(L)33GB5085.6—2007附录K固体废物苯胺及其选择性衍生物的测定气相色谱法1范围本方法适用于固体废物的提取液中苯胺及某些苯胺衍生物含量的气相色谱测定方法.包括:苯胺,...
生化实验室15大常识_资讯中心_仪器信息网
保存在冰箱中的酚,容易被空气氧化而变成粉红色,这样的酚容易降解DNA,一般不可以使用。为了防止酚的氧化,可加入0.1%的8-羟基喹啉及少量巯基乙醇。8-羟基喹啉是带有淡黄色的固体粉沫,不仅能抗氧化,并在一定程度上能抑制DNase的活性。2.如何将不同构型的质粒DNA区别开?