重组蛋白/细胞因子的精准选择和正确使用,你值得拥有!

蛋白标签(proteintag)是指利用DNA体外重组技术,与目的蛋白一起融合表达的一种多肽或者蛋白,以便于目的蛋白的表达、纯化、检测和示踪等。常用的蛋白标签有His/6xHis、Flag、GST、C-Myc、HA、GFP、mCherry、C-Fc。以IL10RB为例,优宁维可提供多种标签重组蛋白:表2:重组蛋白各种标签对比关于标签的位置,蛋白标签...

干货分享:蛋白质融合表达的标签及切割研究汇总

这取决于目标蛋白本身(如稳定性,疏水性),表达系统,纯化后蛋白的用途。01融合标签融合标签的作用是用于检测和纯化目的蛋白,有时也用来增加目的蛋白在细胞质中的可溶性或帮助将目的蛋白运转到细胞周质中以提高目的蛋白的生物活性。(1)多聚精氨酸-标签(Arg-tag)精氨酸-标签通常由5或6个精氨酸组成。它已被成...

探索蛋白质相互作用的奥秘:GST-Pulldown质谱的应用

GST-Pulldown质谱技术基于葡萄糖转移酶(glutathione-S-transferase,GST)与其结合蛋白的亲和性。研究人员将GST标签融合到目标蛋白中,并通过其与GST结合的能力来寻找与该蛋白相互作用的其他蛋白质。该方法的基本步骤包括蛋白表达、融合蛋白的纯化、与目标蛋白的相互作用、GST蛋白复合物的富集以及质谱分析。二、应用领域1....

从GST Pull Down到疾病治疗:生物药物研发中的新突

GSTPullDown技术是一种基于蛋白质相互作用的实验方法,其中GST(谷胱甘肽-S-转移酶)标签被用于特异性地捕获靶蛋白。该技术利用GST标签与靶蛋白的非共价相互作用,通过亲和纯化的方法富集特定的蛋白质复合物。具体步骤包括:首先,目标蛋白质被融合到GST标签上,并通过亲和层析纯化方法与其他蛋白质相互作用。然后,使用GST结...

分子互作|蛋白与蛋白、核酸、小分子互作检测技术介绍、应用及资料...

1、GST标签蛋白表达和纯化;2、GST标签蛋白偶联GSH琼脂糖珠或者磁珠;3、和细胞裂解液或者另一个蛋白共同孵育;4、清洗和洗脱:清洗掉非结合蛋白,洗脱目标蛋白;5、蛋白检测和分析:可以用WB或者质谱进行检测;??应用1、确定两种蛋白是否有相互作用,一般在后面接WB实验;...

J Virol. | CP204L作为非洲猪瘟病毒的一个多功能蛋白,与同型融合...

使用具有C-末端绿色荧光蛋白(GFP)标签的高毒力ASFV格鲁吉亚株的CP204L作为诱饵蛋白(www.e993.com)2024年11月14日。该蛋白在野猪肺(WSL)细胞中稳定表达。将表达GFP的WSL细胞用作阴性对照。分为4组:(i)未感染CP204L-GFP组(mock),(ii)ASFV感染CP204L-GFP组,(iii)未感染ASFVGFP组,和(iv)ASFV感染的GFP组。亲和纯化后,通过质谱法...

亲和层析填料的种类及其应用

GST亲和层析是利用GST融合蛋白与固定的谷胱甘肽（GSH）通过硫键共价结合，通过GSH竞争洗脱的原理来进行蛋白纯化[8]。GST亲和层析纯化蛋白的条件温和，可以保证蛋白的活性。3.MBP-tag亲和层析介质麦芽糖结合蛋白（MBP）有42.5KD大小，不含半胱氨酸（Cys），作为融合蛋白的标签，通常放在N端在大肠杆菌中进行表达...

博格隆亲和层析填料选择的关键因素与策略

除镍之外,金属螯合亲和层析介质还可鳌合Cu2+,Zn2+,Co2+等离子纯化含组氨酸、半胱氨酸和色氨酸侧链的蛋白质和多肽。GST标签有利于蛋白质的可溶表达和活性维持,利用填料上还原型谷胱甘肽配基与含有谷胱甘肽S转移酶的融合蛋白特异性结合的特性可对GST标签蛋白进行分离纯化。26KDa的GST标签后续需内切酶切除,切除标签后...

欧林生物申请一种口服幽门螺杆菌疫苗重组蛋白抗原及制备和应用...

本发明提供一种口服幽门螺杆菌疫苗重组蛋白抗原UreB及其制备方法,在UreB蛋白上增加了组氨酸(his)和谷胱甘肽转移酶(GST)蛋白,表达为his??GST??UreB融合蛋白,通过纯化后UreB蛋白纯度达到95%,每升发酵液的产率可以获得122mg蛋白。且动物实验证明其有效刺激机体产生免疫应答并具备良好的免疫保护作用,可作为预防幽门螺杆菌...

纯化GST标签蛋白得靠它

纯化GST标签蛋白得靠它亲和层析是利用生物大分子与某些相对应的专一分子特异识别和可逆结合的特性而建立起来的一种分离生物大分子的层析方法。谷胱甘肽-S-转移酶(GST)是一种亲和标签,用GST标记真核蛋白可增强融合蛋白的溶解性。此外,带有GST标签的蛋白可以在细菌中高水平表达,但可能会由于蛋白聚集而形成包涵体。