分子互作|蛋白与蛋白、核酸、小分子互作检测技术介绍、应用及资料...
由于沉淀下来的是蛋白复合物,不能证明两个蛋白间有直接的相互作用,可结合GSTpulldown实验进行检测。??实验步骤1、样品制备:细胞裂解释放蛋白;2、免疫沉淀:ProteinA/G琼脂糖珠或者磁珠先和目标蛋白抗体进行孵育,然后加入细胞裂解液;3、洗杂和洗脱:加入洗涤液进行清洗,去除未结合的杂蛋白。洗脱目标蛋白复合...
DNA pull down试剂盒
DNApulldown是一种用于研究DNA与蛋白质互作的技术。通常用来分析目标基因调控区域相结合的转录因子及其他调控蛋白。生物素与链霉亲和素间的作用是目前已知强度最高的非共价作用;其中活化生物素可以在蛋白质交联剂的介导下,与已知的几乎所有生物大分子偶联。因此用生物素标记核酸后,利用生物素和链霉亲和素之间的亲和作...
Nature | 破解领域难题:BRCA1是如何被招募到DNA双链断裂位点?
总结一下:这项研究实际上回答了围绕DNA双链断裂修复通路的两个长期未被回答的科学问题:第一,DNA损伤产生的H2AK15ub信号是如何招募BRCA1-BRAD1到达损伤位点;第二,该复合体在介导同源末端重组修复的同时如何抑制53BP1介导的非同源末端重组(模式图)。这一发现让我们对于DNA损伤修复通路有了新的认识。模式图参考文...
传说中的RNAPULLDOWN是啥?
一般我们认为的基因合成是合成DNA双链,体外转录只是获得RNA的一种方式,相比化学合成纯度更高。所以pull-down实验一般是体外转录得到目的RNA。3.RNA在转录出来后,其OD一般都不高,可以使用吗?咋定量呢?一般会进行电泳检测(DNA电泳方式一样),可以根据maker浓度来判断RNA的浓度。Pull-down实验不需要精确的定量,都会加...
傻傻分不清?DNApull-down来啦!
生物素与链霉亲和素间的作用是目前已知强度最高的非共价作用;其中活化生物素可以在蛋白质交联剂的介导下,与已知的几乎所有生物大分子偶联。因此用生物素标记核酸后,可以纯化出与该核酸结合的各种生物大分子复合物。二、实验流程DNApull-down实验首先针对靶标区域设计特异性DNA探针,探针经过脱硫生物素标记,跟偶联在...
核酸蛋白互作:RNA/DNA pull down,CHIRP
其中,RNA/DNApulldown是研究体外条件下RNA或DNA与蛋白互作的重要技术(www.e993.com)2024年9月7日。该技术通过体外转录目的RNA的一部分或全长,用生物素标记转录产物,再与链霉亲和素磁珠孵育使之固定在磁珠上,用以“pulldown”互作蛋白,纯化的产物蛋白经特定抗体的western-blot实验,可验证某种蛋白与目的RNA/DNA是否有相互作用;纯化的蛋白经质...
“吸血鬼树”何处吸取养分?盘点2019年最怪异10项科学研究...
但今年进行的一项研究显示,尼斯湖里似乎并没有任何“水怪DNA”存在的迹象。遗传学家从这个巨大的湖泊中提取了250多个水样,并对每个样本中漂浮的DNA片段进行了检测。这项调查发现了生活在尼斯湖及周边地区的3000多个物种的基因痕迹,包括鱼、鹿、猪、细菌和人类。但研究团队并没有发现巨型爬行动物或水生恐龙,甚至没有...