过年亲手放过的烟花,在师妹的 qPCR 扩增曲线上复现了
正常的qPCR扩增曲线应为S型,理想的CT值范围在20~30。若出现CT值偏大、无平台期或平台期下降等异常情况,可尝试以下调整:●若CT值偏大,可能是模板量不足或基因表达丰度低,建议增加模板量并观察CT值是否按预期倍数减少。●考虑qPCR反应条件或引物设计可能不合适,导致扩增效率降低。此时,...
qPCR 曲线杂乱、重复性差?你可能忽略了这些点(含福利)
2.CT值异常分析:Ct值过大:可能是模板浓度低,扩增效率低或者体系存在PCR抑制物。应注意提高模板浓度,降低退火温度等优化反应程序。Ct值过低:可能是模板浓度高,引物设计不合适。因此应减少模板量或稀释cDNA,优化程序避免非特异性扩增。除了CT值异常、引物设计问题等,我们还常遇到RNA降解、曲线异常等...
揭开“内标”未出之谜
本案例通过查看内标基因原始荧光扩增曲线,最终找到内标Ct值和扩增曲线未出的原因为扩增仪对数据优化处理的结果,通过参数的重新设置使问题迎刃而解,这也提示我们在日常工作中应了解检验各个项目的检测原理和干扰因素,对异常的检验结果,不能单纯依赖仪器,重视原始数据的查看。专家点评山西省运城市中心医院检验科主任副...
PCR异常扩增曲线原因及案例分析
耗材对于荧光定量PCR来说比较重要,很多异常的扩增曲线是由于耗材使用不当引起的。常见的耗材相关问题包括:1)错误使用成普通PCR仪器所对应的耗材普通PCR耗材一般透光度比较差,会造成荧光扩增曲线异常,比如打折的扩增曲线(图三)。图三:错误使用普通PCR耗材的结果2)未选择跟仪器加热模块规格匹配的耗材荧光定量PCR...
新冠内标扩增反应曲线呈锯齿状,原因是……
1仪器不稳定导致的扩增曲线异常(突然停电或电压不稳);2如果尖峰向下可能是卤素灯老化所致发射光源不稳定(指卤钨灯光源的激发器);3如果单一的孔位出现尖峰,除了考虑仪器或孔位问题外,还要考虑反应体系是否有气泡所致。案例总结综上所述,以上两例内标异常扩增反应曲线原因总结如下:...
如何解析新冠核酸检测中的异常扩增曲线?
原因分析:(1)仪器不稳定导致的扩增曲线异常(也可能突然停电或者电压不稳)(www.e993.com)2024年10月23日。(2)尖峰向下,可能是卤素灯老化所致发射光源不稳定(指卤钨灯光源的激发器)。(3)尖峰向上,考虑仪器或者孔位问题,还要考虑反应体系是否存有气泡。解决方案:(1)检查仪器性能,检查实验室电压情况。
PCR异常扩增曲线案例分析与解决办法盘点!
从图形可见,某标本三条扩增曲线在第7—11循环之间呈现一个急剧上升的信号飙升的现象,随后三条曲线像是什么都没发生一样又按着“正常”的轨迹继续扩增,结果由于曲线打折后与阈值线相切的缘故,得出“强阳性”的结果。2分析:由于整板其他孔位曲线没有异常情况出现,怀疑可能该孔位溶液有气泡影响:气泡可以让光路发...
达安科普:导致新冠核酸快速检测结果异常常见的3个原因
在新冠核酸快速检测过程中,往往会设置对照组,进行检测参照,当操作人员在操作不规范时,可能会造成样本污染,从而导致假阳性或者检测曲线翘尾的现象。这个时候,就会导致样本新冠核酸快速检测结果异常。3、新冠核酸快速检测结果单阳情况。目前市面上的新冠核酸快速检测试剂常常会对病毒的两个特异性位点:ORF1ab基因和N基因...
PCR实验连续失控!原因竟是这个...
我们从B扩增试剂出现失控现象开始,进行失控原因的查找,大致方向如下:1.扩增试剂:重新配置新的扩增试剂B,同个批次及不同批次的B试剂,排除因为原有的扩增试剂失效而造成的实验失控现象;2.实验操作:规范工作人员的操作步骤,排除因为操作不规范所造成的实验失控现象;同时实验中尽量多的使用B试剂进行实验,从更加规范...
纳奥生物,描绘精准医疗器械的微笑曲线
上海纳奥生物科技有限公司(以下简称“纳奥生物”)创始人亓立峰表示,创立之初纳奥生物主要依靠“团队投资+政府支持”,但随着企业的运作发展,由于医疗器械投入周期长、生产和研发耗资大,公司的融资情况远远达不到企业发展的资金需求,企业需要不断提升自身造血能力,打造研发和销售微笑曲线。目前纳奥生物已经投入超过3,000万研...