“阴差样错”了,怎么剖新析“肝”?|乙肝|iu|核酸|扩增|hbv|dna...
可排除核酸提取效率过低或丢失、标本中含有抑制物(血红素﹑脂血﹑胆红素等)﹑扩增仪孔间温度的差异等原因造成的结果假阴性。前两次检测,样本检测靶标从开始循环就出现明显荧光信号,考虑因样本中HBVDNA浓度过高造成的假阴性。实时荧光PCR通常包括基线期﹑指数期﹑线性期﹑平台期四个时期,前两次检测因扩增反应曲线没有...
拜qPCR 所赐,我成功跻身实验室第一显眼包
A1:扩增曲线存在问题时,首先应确认基线校正或ROX校正前的原始曲线,扩增曲线的荧光信号值低多数是由于背景荧光信号值过高造成的。使用嵌合荧光法进行检测时,背景荧光信号偏高大多数是由于模板量过高,染料嵌入到初始模板DNA中发出荧光造成的。使用荧光探针法进行检测时,背景荧光信号偏高大多是由于设计的探针质量差使淬...
大规模新冠核酸筛查中出现的异常扩增曲线分析
该类型曲线反应孔多数会出现液面偏低情况,可能是扩增试剂分液不准确,或反应孔气密性差,反应过程中溶液蒸发引起探针浓度增加。3解决方案:配置试剂时注意检查试剂液面,核酸加样后用力压实封好反应板,上机扩增前再次检查有无缝隙。2倒“S”型原始曲线图:基线调整后曲线图:1曲线特点:曲线如倾倒的“S”...
小曲线大学问-新冠核酸异常扩增曲线知多少?
原因分析:软件默认基线设定不准确造成扩增曲线异常。解决方案:根据检测试剂的要求设定适宜的基线。03软件优化造成的异常扩增曲线曲线特点:软件优化后扩增曲线向斜上方抬起,导致Ct减小,根据优化后扩增曲线会误判为阳性,但原始信号未有明显扩增。原因分析:软件自动基线优化不准确,可能会放大异常扩增曲线的信号。解决方...
如何解析新冠核酸检测中的异常扩增曲线?
原因分析:(1)软件在进行基线自动扣除的时候出现错误,引起了扩增曲线抬升。(2)选用的耗材、试剂或者操作的原因导致背景荧光信号有所波动,造成反应孔的自动基线扣除错误。(3)探针浓度过高,体系中有荧光物质污染,扩增效率低。解决方案:(1)采取手动调整基线的方法,重新定义基线即可正常(即将基线起点改为荧光信号...
一文揽尽:荧光定量PCR扩增曲线哪个阶段最重要
由于线性期和平台期的扩增产物已不再呈指数级的增加,PCR的产物量与初始模板量之间没有线性关系,所以也不能通过这两个阶段的PCR产物量计算出初始模板量(www.e993.com)2024年9月17日。想要知道初始模板量的多少,还要依赖指数期的Cq值进行计算。▲图1.qPCR反应的重要阶段如图所示,标准的扩增曲线是呈现S型的。曲线是否符合标准,不仅跟样本起始...
qPCR扩增曲线的自述
三.扩增曲线末尾起跳,但没有完整扩增1.可能存在污染:建议对样本进行复检。2.如果是阴性对照,可能是引物二聚体或污染导致;如果是正常样本,说明浓度过低或者加样量不足。四.复孔重复性差1.加样误差导致:定期校准移液器;同时可先配制除模板以外的其他试剂的预混液,然后进行分装再加入模板,其次加大模板上...
荧光曲线异常太头疼?看了这篇文章你就懂啦
3.扩增曲线不增反降。可能是因为模板浓度过高,基线期内起峰,导致仪器将扩增曲线往基线位置下拉,导致扩增曲线越跑越低,不妨试试减少基线期循环数,可能会取得不错的效果哦。当然,以上所有的解决方法都建立在仪器没有出问题的基础上,要是尝试各种方法都解决不了,那么你就该物色物色新的PCR仪啦!实时荧光定量PCR仪,...
核酸检测假阳性?令人哭笑不得的原因。
出现第二次异常曲线后,我静下心来整理思绪,开始分析原因:1、试剂配制过程试剂配制完全按照操作流程规范操作,无原则性错误。2、核酸提取过程样本经56℃灭火30min后进行核酸提取,吸样操作规范,核酸提取在全自动核酸提取仪中进行,减少了人为操作误差。
PCR异常扩增曲线原因及案例分析
常见异常曲线原因1确认软件设置是否正确对照试剂盒说明书,检查时间、温度、循环数、荧光采集等是否设置正确。有一个比较容易忽略的设置问题是,需要看下所选用的试剂中是否含有ROX来作为参比荧光染料。2确定耗材及仪器配件是否使用正确耗材对于荧光定量PCR来说比较重要,很多异常的扩增曲线是由于耗材使用不当引起的...