CRISPR干预的CHO细胞系开发方法

由于整合位点不可控,RI造成的两个主要缺点包括由于转基因插入的异质拷贝数和位置导致的高克隆变异,以及由于转基因拷贝数的丢失、染色体重排和表观遗传调控导致的生产时间克隆稳定性的降低。因此,将转基因敲入(KI)到转录活跃的基因组热点的靶向整合(TI)方法已成为一种可控和可预测的CLD方法。将转基因精确插入所谓的基因...

国自然撰写:经典分子机制研究(一)|位点|质粒|扩增|dna|rna|聚合酶...

因在基因B启动子扩增的引物的两端插入了NheI和HindIII酶切位点,故用NheI和HindIII限制性酶酶切后与pGL3-promoter载体上的NheI和HindIII粘性末端位点相连。2.1.3构建pGL3-Basic-基因BP(-1761/+37)质粒P(promoter)将酶切的PCR产物连入pGL3-Basic质粒,经转化细...

干货| 酶切实验切开 or 切不开,真的是玄学吗?

??基因组DNA使用的酶切体积一般高于PCR产物以及质粒DNA。4.限制性酶切位点??酶的识别位点过于接近终端(线性DNA)以及切割位点相邻(双酶切)都可能影响酶切效率。切割位点相邻的双/多酶切需注意酶切顺序,先酶切识别序列两端需要有多个碱基的位点,再酶切其他位点。5.DNA结构??超螺旋DNA完全酶切比线性...

全球十大CDMO公司,都在发生着什么?(上)

2024年6月25日,赛默飞世尔科技推出了KingFisher??PlasmidProMaxiProcessor*(PlasmidPro),这是唯一一款全自动大规模质粒DNA(pDNA)纯化系统。该系统可在约75分钟内制备高纯度质粒DNA,仅为传统工艺时间的一半,且无需离心。质粒在细胞和基因疗法、单克隆抗体疗法、mRNA疗法和疫苗的开发中发挥了重要作用。

人偏肺病毒融合蛋白疫苗:研究进展

位点Ⅱ:位于位点Ⅲ和Ⅰ之间,是单克隆抗体(monoclonalantibody,McAb)M1D2和M1C7的靶标,该表位在hMPVPreF和PostF构象中保守,故该位点特异性的McAb均可以与PreF和PostF结合。hMPVF蛋白Ⅳ位点:与RSVF蛋白相似,是交叉中和抗体和Ⅳ位点结合抗体101F、54G10和17E10的靶点;McAbMPV481具有hMPVF蛋白特异性,...

堪称分子生物学界的「瑞士军刀」,这款工具分分钟带你成为大佬

用SnapGene打开表达载体pET28a的质粒图谱(www.e993.com)2024年11月19日。根据实验将使用的无缝克隆试剂以及技术选择相应的选项,以In-Fusion为例。依次在工具栏中点击:Actions-In-FusionCloning-InsertFragment(这里以插入一个片段为例)。光标放在载体的MCS(多克隆位点)处,选择页面最下面一排的「Sequence」显示核苷酸序列以方便拖选(要...

啥是质粒?从生物武器到转基因食物都跟它有关

以转基因马铃薯为例,科学家将含有抗旱相关基因的DNA片段通过PCR技术进行体外扩增,合成之后利用各类酶剪切DNA片段,再把产物拼接于Ti质粒多克隆位点处,得到重组质粒。重组后的质粒通过根癌农杆菌介导,侵染马铃薯愈伤组织,作物即可获得外源抗旱基因,从而表现出耐旱性。

mBio:首次揭示质粒编码的可介导替加环素耐药的新型多重耐药外排泵

本研究进一步分析了tmexCD1-toprJ1的基因环境和质粒结构,发现tmexCD1-toprJ1位于可接合的IncFIA型质粒(pHNAH8I-1)上,同时该质粒上还携带黏菌素耐药基因(mcr-8)。之后通过分析这种新型外排泵基因簇的基因环境,发现在外排泵基因簇上游存在位点特异性整合酶基因,该整合酶基因与tnfxB1-tmexC1-tmexD1-toprJ1基因...

PCR,酶切,质粒,载体构建,电泳:SnapGene 最全最详细使用教程

2.给非编码序列命名:如多克隆位点。先找到质粒图谱中的多克隆位点的第一个酶切位点和最后一个酶切位点。点击左侧sequence,找到两个酶切位点之间的序列。sequence按钮3.给质粒图谱增加引物序列:按Edit→Find,输入引物序列,找到质粒序列对应位置,点击Primers→Addprimer,弹出该界面:...

克隆经验—帮助新手快速做出克隆

二、PCR产物接入质粒的克隆简介:取100μLPCR产物,酒精沉淀、干燥,直接加入酶切体系酶切;将用作载体的质粒A(制作大片断)酶切3μL;切胶回收来自质粒A的大片段,和来自PCR产物的小片断,并回收到一管中;酚氯仿法回收DNA,酒精沉淀,干燥;加入8μL水、1μLligaseBuffer、1μLligase,4℃过夜;次日转化涂板...