实验室超声波破碎仪(细胞粉碎机、裂解器)与雪花制冰机组合案例
细胞裂解:使用含有去垢剂和抑制剂的裂解缓冲液(如TRIzol)和超声波细胞破碎仪对样品进行破碎处理,释放细胞内的DNA/RNA。去除杂质:通过酚-氯仿抽提、离心等方法去除蛋白质、多糖等杂质,得到较为纯净的DNA/RNA溶液。沉淀与洗涤:加入乙醇或异丙醇等沉淀剂使DNA/RNA沉淀,随后用70%乙醇洗涤沉淀以去除盐分和有机溶剂。
谁是凶手,DNA在说话——法医实验室DNA鉴定的那些事儿
酚-氯仿法提取dna最能说明这一点,其通常用于提取血液里的dna。将离心机温度设置为4°c(或39.2°f)可以有效去除蛋白质和其他杂质,并保持dna带谱的完整性。与之相比,非冷冻台式高速离心机在离心过程中可能造成dna断裂,同时,离心时转子高速旋转产生的热量也可能降解dna样品。性能优异的实验室设备可以帮助法医调查员...
实验帖-DNA提取那点事儿~~
作为表面变性的酚与氯仿,在去除蛋白质的作用中,各有利弊,酚的变性作用大,但酚与水相有一定程度的互溶,大约10%~15%的水溶解在酚相中,因而损失了这部分水相中的DNA,而氯仿的变性作用不如酚效果好,但氯仿与水互不相溶,不会带走DNA。所以在抽提过程中,混合使用酚与氯仿效果最好。经酚第一次抽提后的水相中有残...
质粒DNA的提取和制备
质粒(plasmid)是一种染色体外、具有双链闭环结构的DNA分子。质粒具有自主复制能力,能使子代细胞保持它们恒定的拷贝数,可表达它携带的遗传信息。目前,质粒已广泛地用作基因工程中目的基因的运载工具─载体。从大肠杆菌中提取质粒DNA也是一种分子生物学最基本的方法。质粒DNA的提取是依据质粒DNA分子较染色体DNA为小,...
大白鼠肝DNA的提取与鉴定材料和步骤
一、目的掌握从动物组织中DNA基本原理和方法,了解利用电泳技术分离、鉴定核酸的原理和方法。二、原理真核生物DNA主要以核蛋白形式存在于细胞核中,因此制备DNA必须先粉碎组织,裂解细胞膜和核膜,使核蛋白释放,在除去蛋白质、脂类、糖类和RNA等物质,得到纯化的DNA。在本实验的提取DNA反应体系中,SDS(十二烷基磺酸钠...
RNA的提取与提纯
三、加入氯仿加入1/5体积Trizol的氯仿(CHCl3),我用了1mLTizol,因此这里加入了200μL的氯仿(www.e993.com)2024年9月30日。加入氯仿后,上下翻转混均匀,室温下静置5分钟,12000g4℃离心15分钟,然后将上清液转移至新的EP管中(抽取过程要轻柔,避免将中间的白色沉淀抽入)。注:氯仿是良好的有机溶剂,可以将有机相和无机相分离,被trizol裂解的细...
高通量测序之RNA提取那点事~~
组织匀浆后加氯仿分相时,因TRIzol试剂pH<5.2,则DNA优先分配于有机相,水相则是RNA,组织蛋白以及部分核蛋白+大片段基因组变性以沉淀形式形成中间相。3.不同沉淀剂的作用原理及应用异丙醇沉淀原理是降低了介电常数,破坏了了核酸分子表面的水化层。另外还可以利用等电点法和盐析法沉淀,如利用醋酸钠(3M,pH5.2)...
龙琪琛 胡敏 等:液相色谱-串联质谱法检测血清鞘氨醇-1-磷酸方法的...
2.提取回收率:提取回收主要用于考察在样本前处理过程中,分析物的损耗。通过在蛋白质沉淀之前或之后加入S1P标准品和内标,来评估提取回收率。内标的提取回收率:提取前加内标的内标峰面积/提取后加内标的内标峰面积;S1P的提取回收率:提取前加S1P的S1P峰面积/提取后加S1P的S1P峰面积。
最强PCR原理攻略|PCR|DNA|检验|-健康界
引物:(PCR引物为DNA片段,细胞内DNA复制的引物为一段RNA链)引物有多种设计方法,由PCR在实验中的目的决定,但基本原则相同。酶:PCR所用的酶主要有两种来源:Taq和Pfu,分别来自两种不同的噬热菌。其中Taq扩增效率高但易发生错配。Pfu扩增效率弱但有纠错功能。所以实际使用时根据需要必须做不同的选择。
iMeta|俄亥俄州立大学郑庆飞组发表多组学方法研究肿瘤微生物组综述
微滴微流体可以将大量群体分成单个细胞,通过一系列酶促步骤提取和分割基因组。在这些单细胞被测序之前,遗传物质被放大和标记。这是一项结合了微流体技术、DNA条形码和测序技术的综合技术。在裂解和纯化基因组DNA之前,被包封的微生物可以直接在液滴中培养,并在第一次基因组扩增过程中生长至数百个细胞。然后,使用细胞...