Nature重磅综述 |关于RNA-seq,你想知道的都在这

在short-readRNA-seq建库前利用唯一分子标识符(UMI)标记cDNA分子,从而解决短读长问题做到测序全长mRNA。基于这个技术可以对长达4kb的转录本异构体进行鉴定和定量。从根本上解决short-cDNA测序固有限制的最有效的方法还是long-readcDNA测序和dRNA-seq方法。long-readcDNA测序尽管Illumina是目前主流的RNA-seq...

【沃信科普】使用微孔板振荡器混合微量样品时需要哪些试剂?

蛋白酶K:一种常用的酶,用于消化蛋白质,特别是在DNA提取过程中,可以帮助去除与DNA紧密结合的蛋白质,从而提高DNA的纯度。RNaseA:用于去除RNA,防止RNA对DNA提取的干扰。在需要纯化DNA的实验中,RNaseA是不可或缺的。无水乙醇:在DNA或RNA提取过程中,常作为沉淀剂使用,通过离心可以将核酸沉淀下来,而去除其他杂质。

鹦鹉博尔纳病毒的鉴定与M基因遗传进化分析

PCR反应体系:以血液中提取的DNA为模板,以M1、M2为引物进行PCR反应,反应体系为25ul:2×TransTaq-TPCRSuperMix12.5ul、模板DNA1.0uL、M11.0uL、M21.0uL、ddH2O,9.5uL;反应程序为:94℃4min;94℃30s,50℃30s,72℃1min,35个循环;72℃,10min。扩增产物经1%琼脂糖凝胶检测,将PCR阳性...

新冠免疫诊断领域最新进展,4款试剂获批,20多家企业发布产品

东方基因已成功研制出新型冠状病毒核酸检测试剂盒(免提取荧光PCR法)和新型冠状病毒抗原检测试剂(胶体金法),并已用于临床试验和科研试用,其中核酸检测试剂盒的临床试验准确率高达97%以上;胶体金法产品操作简单,可以将检测时间缩短至10分钟。这两个试剂产品经过省药监局审核推荐,正向国家药监局申请注册。凯基生物新型2...

传说中的RNAPULLDOWN是啥?

样品量:样品量直接影响提取蛋白的含量,最终影响富集蛋白量;其他物质的干扰等影响因素:在没有细胞系的情况下,选择组织样品。动物组织中脂肪等物质存在影响;植物叶片组织叶绿素等物质丰度较高存在影响。常见问题解答1.实验全程如何预防RNA降解?实验使用的所有试剂耗材需经过去RNA酶处理...

高通量测序之RNA提取那点事~~

像QIAGEN、天根、艾德莱等国内外厂家,均有不同应用方向的提取试剂盒可供选择,且质量较佳(www.e993.com)2024年11月13日。但在具体工作中需要注意的是,使用时一定要根据自己的实验需要购买专用提取试剂盒,如果不是专用试剂盒,或许能提出RNA,但不能确保其质量以及完整性,会影响RT-PCR、Northernblot、Dotblot、RealtimeRTPCR、芯片分析、...

植物基因组DNA的提取实验原理和实验步骤

掌握植物总DNA的抽提方法和基本原理。学习根据不同的植物和实验要求设计和改良植物总DNA抽提方法。二、实验原理通常采用机械研磨的方法破碎植物的组织和细胞,由于植物细胞匀浆含有多种酶类(尤其是氧化酶类)对DNA的抽提产生不利的影响,在抽提缓冲液中需加入抗氧化剂或强还原剂(如巯基乙醇)以降低这些酶类的活性。在...

实验室最不稳定的是什么?RNA 和我提取失败后的情绪

使用稳定试剂:将样品浸泡在稳定试剂中(如DNA/RNAShield),使核酸酶失活,并在环境温度下长时间保护核酸。适用于实地收集样本或处理珍贵的病人样本(例如组织活检、全血等)。如何确保样品完全溶解?在RNA提取过程中,提高RNA产量和质量的最佳方法是保证样品完全裂解。然而,不用的样本需要针对性的设置裂解方案。例...

Naveni PLA原位蛋白互作技术常见FAQ

将两种一抗分别与位于一种蛋白质或两种邻近蛋白质上的目标表位结合,再使用Navenibodies(与专有oligo臂结合的精选抗体)与各自的一抗结合,当Navenibodies靠近时,附着的寡聚物能形成DNAcircle,再加入聚合酶,就会启动滚圆扩增(RCA)过程。通过标记的探针与扩增的DNA结合,显色形成亮点。问2.什么是Navenibodies...

一文了解蛋白酶K!|RNase|蛋白酶|RNA|提取|浓度|-健康界

在DNA、RNA提取过程中的应用蛋白酶K能降解与核酸结合的蛋白质,促进核酸的分离,在提取高分子量核酸时有很大的优势。蛋白酶K还常被用于RNA提取过程中RNase的抑制和降解。RNA的质量对于Northem印迹及杂交分析、cDNA合成及体外翻译等实验的成败至关重要。而RNA极不稳定、易于被广泛存在的RNase降解,因此利用蛋白酶创造一...