知识分享|一文了解实时荧光定量PCR(qPCR)技术的原理与分类
平台期:随着DNA聚合酶、dNTP和引物探针消耗殆尽,扩增信号达到稳定,不再增加,反应到达平台期。实时荧光定量PCR的三个阶段2.常用参数为了便于定量分析,在qPCR反应中引入了荧光阈值和循环阈值(Cyclethreshold,Ct)两个概念:荧光阈值:是人为在荧光扩增曲线上设定的一个值。Ct:是指在PCR反应过程中,每个反应管内的...
...兽医师等:基于行业标准中马和驴成分检测方法用于骡肉检测的分析
结果如图2所示,对于马成分检测,以驴基因组DNA作为阴性对照,未见扩增曲线,以马基因组DNA作为阳性对照,出现特异性扩增曲线;对于驴成分检测,以马基因组DNA作为阴性对照,未见扩增曲线,以驴基因组DNA作为阳性对照,出现特异性扩增曲线。对9份样品分别进行马、驴成分检测,结果显示,样品H1~H3、L1~L3均检出马成分,且Ct...
“阴差样错”了,怎么剖新析“肝”?
调节基线期为1-2个循环,重新分析,结果仍无变化。考虑检测试剂线性(100IU/mL-5×108IU/mL)问题,为避免基质效应,采用HBVDNA阴性血浆对原样本进行不同浓度稀释(1:10、1:20、1:100),重新提取核酸检测,原样、稀释样CT值分别为:5.25、8.63、9.85、11.6,标准曲线计算定量结果分别为:1.48×108IU/mL、1.54×107IU...
华盛昌实时荧光定量PCR分析仪取得医疗器械注册证
FZ-100实时荧光定量PCR分析仪具有稳定灵敏的光路设计,有4通道荧光光路无需光学校准,减少杂散光的干扰;配有高效准确的温控系统,温度控制灵活;采用单机一体化设计,配置8寸触摸控制屏,无需额外配置电脑,配置WIFI功能,实现报告推送分享;清晰简洁明了的APP操作界面,涵盖多种分析模式,扩增曲线、定性分析、绝对定量分析等,结果...
揭开“内标”未出之谜|荧光|扩增|试剂|核酸|pcr_网易订阅
优化处理后的扩增曲线为PCR扩增仪对实时监测到荧光信号进行平滑处理、去除噪声和异常值等操作,通过对这些数据优化处理,可以使得扩增曲线更加平滑、清晰,更容易进行分析和解读,也是曲线美化的重要手段[3]。其中“噪音容限”设置可去除一些翘尾现象,但同时也会影响对基因检测的灵敏度,实际工作中需要根据检测选择适当的参数...
大规模新冠核酸筛查中出现的异常扩增曲线分析
曲线如倾倒的“S”型,呈现先下降再上升后下降的特点,形似光滑的波浪状(www.e993.com)2024年10月23日。02原因分析:仪器的自动基线设定为6-12循环,因样本病毒核酸载量高,扩增曲线起跳早,位于或早于基线循环处,导致曲线异常。03解决方案:该类型曲线需手动调整基线范围,将基线设定前移至合适循环,重新分析。
PCR异常扩增曲线案例分析与解决办法盘点!
标本包括内源性内标不出现明显的扩增曲线。2分析:标本采集时是否有采到样;进行核酸提取时是否漏加或是因为试剂问题提取不成功。3解决:重新采样检测或是重新进行核酸提取。案例21问题:PCR两个靶基因的扩增曲线呈斜直线型。2分析:出现此种情况可以注意下检测完的反应管里面该孔位的标本是否出现反...
PCR实验室常见问题及异常结果分析!
1、首先我们看一下PCR正常扩增曲线,是比较平滑的S型曲线,见下图:2、常见异常结果分析2.1案例12.1.1现象:常见单基因翘尾且出现较大的Ct值和单基因翘尾无Ct值现象,见下图:2.1.2常见原因:阴性质控曲线翘尾,存在阳性质控或阳性标本污染;样本曲线翘尾,表示目的基因浓度低或者存在非特异性扩增或者存在污染。
真实案例分析!核酸检测为何频频出现假阳性假阴性 | 临床经验交流
图2刘某某单采标本扩增曲线(a:原始荧光曲线;b:扩增曲线)原因分析①10合1混采标本采集场所与疫苗接种混用,间隔时间不足24小时,物体表面(桌面)采样后检出新冠肺炎病毒核酸。可能标本采集时被疫苗污染。②单采时,刘某的新型冠状病毒核酸扩增曲线不典型,斜直型曲线,而原始荧光曲线无起峰,检验人员判读结果经验不足...
qPCR体系优化和常见问题分析
实时荧光定量PCR常见问题分析1.可疑的扩增曲线真正的扩增曲线,有特征的形状:首先背景信号,然后是三个增长阶段(指数增长期、线性增长期和平台期)。如果不是同时具有特征性的三个增长阶段,没有典型的指数增长期,那就不存在扩增。平台期很低也是常见的异常扩增曲线。可能是模板的浓度太低。通常如果模板的起始浓度...