“阴差样错”了,怎么剖新析“肝”?
实时荧光PCR通常包括基线期﹑指数期﹑线性期﹑平台期四个时期,前两次检测因扩增反应曲线没有基线期,PCR仪判读为无效扩增曲线,无法计算阈值(设定为基线期荧光强度标准差的10倍)、CT值(每个反应管的荧光强度达到阈值所经历的循环数),因此没有CT值,导致结果为假阴性。核酸提取效率的差异性或实验本身误差,样本反复冻融...
大规模新冠核酸筛查中出现的异常扩增曲线分析
曲线呈现出不典型的“S”型,有极短的对数扩增上升期,后进入平台期,荧光强度高于阈值,但远低于正常扩增曲线荧光强度,多见于顶部采光的PCR仪。02原因分析:该类型曲线可能为使用的PCR反应板封膜在PCR过程中受到水蒸气的影响产生变形,引起“光学扭曲”现象;也有可能是反应液中有气泡,气泡可以让光路发生折射,在气泡...
PCR异常扩增曲线案例分析与解决办法盘点!
PCR两个靶基因的扩增曲线呈斜直线型。2分析:出现此种情况可以注意下检测完的反应管里面该孔位的标本是否出现反应液面明显低于其他反应孔位的液面,大多数是由于在分装试剂时分液不准确造成,或是因为实验所采用的PCR反应管气密性较差,在反应的过程中出现了溶液的蒸发引起探针浓度增加,导致曲线呈斜直线上升。3...
收藏!PCR异常扩增曲线分析攻略
比如在做标准曲线的时候是否是梯度稀释的标准品,如果不是梯度稀释标准品,可能会引起标准曲线扩增效率或者R2值异常;从冰箱冷冻中取出的试剂是否有混匀,如果试剂融化后没有混匀,这时候取出的试剂不是均一的,会影响后面的扩增;定量PCR预混液跟核酸模板加好后是否混匀,如果没有混匀,特别是样本体积比较大的时候(超过PC...
PCR实验室常见问题及异常结果分析!
1、首先我们看一下PCR正常扩增曲线,是比较平滑的S型曲线,见下图:2、常见异常结果分析2.1案例12.1.1现象:常见单基因翘尾且出现较大的Ct值和单基因翘尾无Ct值现象,见下图:2.1.2常见原因:阴性质控曲线翘尾,存在阳性质控或阳性标本污染;样本曲线翘尾,表示目的基因浓度低或者存在非特异性扩增或者存在污染。
一文揽尽:荧光定量PCR扩增曲线哪个阶段最重要
如图所示,标准的扩增曲线是呈现S型的(www.e993.com)2024年10月23日。曲线是否符合标准,不仅跟样本起始量、qPCR体系配制、反应程序等相关,更依赖于一套高品质的实时荧光定量PCR系统。对于实时荧光定量PCR系统来说,高度检测灵敏度、高度重复性和高度稳定性,是每一台qPCR仪的追求。高性能的AzureCielo??实时荧光定量PCR系统完全符合以上要求,该系统...
小而美的IVD细分领域!耳聋基因检测市场分析报告
权威认证:NMPA三类注册,ISO13485认证。S型扩增曲线,与测序结果100%一致定制筛查:位点可拆分,产前、孕期、新生儿、听障患者等不同人群针对性检测,更加人性化覆盖全面:先天性耳聋、迟发性耳聋、药物性耳聋相关基因的热点突变简便快速:现有PCR仪即可检测,人工操作少,易学易用,稳定性高,易判读,1.5小时即可提供检验报告...
春节疫情防控 | “神秘而平凡”的PCR检验人
结果出来后,分析扩增曲线,判读检测结果。不允许出现一例假阴性或者假阳性,一旦出现异常,必须要第一时间上报。核酸检测的工作特点是长耗时、高集中。防护服不透气,负压实验室比在正常环境感觉要更闷一些,通常一次检测做下来,他们早就浑身大汗,衣服湿透。因为长时间戴手套、护目镜和口罩,他们的脸上、鼻上被勒出道道红...
新手入门:荧光定量PCR详细介绍,你想要的这里都有
基线:是指扩增曲线的水平部分。是指在PCR扩增反应的最初数个循环里,荧光信号变化不大。接近一条直线,这样的直线即是基线。每个样品孔都设置独立基线。阈值:是一个荧光强度值,荧光域值必须设定在PCR扩增的指数期。阈值线:穿过阈值与X轴平行的直线称为阈值线;...
PCR异常扩增曲线原因及案例分析
异常曲线1:PCR扩增抑制原因分析:H07存在扩增抑制解决方案:将样本稀释后进行扩增(抑制物的影响可通过稀释样本消除)异常曲线2:自动基线设置问题原因分析:自动基线问题解决方案:手动设置基线。将BaselineEnd设置为“扩增信号出现的前一个循环”即,图片展原始为26,将其设置为20,点击OK即可恢复正常曲线。