qPCR 曲线「丑」到拿不出手!除了引物,这些问题也要注意
Ct值过低:可能是模板浓度高,引物设计不合适。因此应减少模板量或稀释cDNA,优化程序避免非特异性扩增。CT值重复性差:仪器、试剂、耗材、实验操作细节等众多因素,具体问题具体分析。3.qPCR扩增曲线异常:正常扩增曲线应呈平滑S型。常见异常包括扩增曲线锯齿状(RNA浓度低或体系含有杂质);无法到达平台期(...
新冠内标扩增反应曲线呈锯齿状,原因是...
主要有两个原因:(1)扩增信号太弱,经系统矫正后,就会产生不平滑的线,可以通过提高模板浓度重复实验。(2)仪器本身的问题,可能在扩增过程中仪器出现波动或者检测孔本身出现异常。图8(图片来源于网络)2.扩增曲线呈锯齿状且不连续如图9。原因是典型的ROX添加不当导致的异常结果。图9(图片来源于网络)另一篇推...
如何解析新冠核酸检测中的异常扩增曲线?
2.扩增曲线不平整,有向上或者向下的尖峰原因分析:(1)仪器不稳定导致的扩增曲线异常(也可能突然停电或者电压不稳)。(2)尖峰向下,可能是卤素灯老化所致发射光源不稳定(指卤钨灯光源的激发器)。(3)尖峰向上,考虑仪器或者孔位问题,还要考虑反应体系是否存有气泡。解决方案:(1)检查仪器性能,检查实验室...
大规模新冠核酸筛查中出现的异常扩增曲线分析
整板内标扩增曲线多孔未起跳,起跳的内标曲线呈现峰值低的情况。02原因分析:耗材不匹配导致。该品牌扩增仪为顶部采光模式,而PCR板使用了透光性不佳的硅胶封口膜,影响了反应孔荧光信号收集,导致多孔内标未起跳,起跳孔荧光峰值低的异常结果。03解决方案:了解使用仪器的性能,选用适配耗材,更换为透明耐高温的透明封...
PCR实验连续失控!原因竟是这个...
我们从B扩增试剂出现失控现象开始,进行失控原因的查找,大致方向如下:1.扩增试剂:重新配置新的扩增试剂B,同个批次及不同批次的B试剂,排除因为原有的扩增试剂失效而造成的实验失控现象;2.实验操作:规范工作人员的操作步骤,排除因为操作不规范所造成的实验失控现象;同时实验中尽量多的使用B试剂进行实验,从更加规范...
那么问题来了,qPCR又是什么?
如上图可得,如果起始模板量浓度高,则可在较早的循环中观察到扩增,CT值小;如果起始模板量浓度少,则会在稍后的循环中观察到扩增,CT值大(www.e993.com)2024年10月22日。对于标准品如何选择或者制备,标准曲线的绘制,请在其它学习平台搜索了解,这里小编就不一一写出来啦!相对定量多用于:基因在不同样本中的表达差异、基因在不同药物作用下的表达...
微生物扩增子测序图表解读(实例数据)
物种的丰富程度由曲线在横轴上的长度来反映,曲线越宽,表示物种的组成越丰富;物种组成的均匀程度由曲线的形状来反映,曲线越平坦,表示物种组成的均匀程度越高。如果曲线越平滑下降表明样本的物种多样性越高,而曲线快速陡然下降表明样本中的优势菌群所占比例很高,多样性较低。
三问美新冠检测:如何运作?为何检测?为何检不上?
美国或将迎来一个十分可怕的感染曲线,受感染人数呈指数级增长。很大一部分美国人可能会发展成为重症患者,进而需要入院治疗,其中一部分很有可能会不治身亡。在1月或2月份的时候,我们没有人着手开展足够的检测,来防微杜渐;而现在,依旧也没有足够的检测,来摸清未来的严重性。个中原因既有科学上的因素,也有政治...
任泽平:特斯拉登顶全球第一大市值汽车公司意味着什么?
不同于铅酸电池,锂电池由于具有非线性的充放电曲线,造成不论是电芯或是电池包层面,监测、预估和管理的难度都大大增加。如果管理不当,个别电芯的过度充放电将引起永久性的电池损伤,造成整个电池系统电压、温度不稳定,严重的将导致热失控事件。因此电池管理系统对电池容量、循环寿命和安全性均起着至关重要的作用。
PCR异常扩增曲线原因及案例分析
常见异常曲线原因1确认软件设置是否正确对照试剂盒说明书,检查时间、温度、循环数、荧光采集等是否设置正确。有一个比较容易忽略的设置问题是,需要看下所选用的试剂中是否含有ROX来作为参比荧光染料。2确定耗材及仪器配件是否使用正确耗材对于荧光定量PCR来说比较重要,很多异常的扩增曲线是由于耗材使用不当引起的...