实验安全 | 拒绝成为实验“耗材”,核酸提取“避毒”指南请查收~
TRIZOL法RNA提取TRIZOL是一种经典的总RNA抽提试剂,具有高样本兼容性。除了作为单一试剂使用,TRIZOL也可搭配自动化和核酸吸附柱,被广泛应用于RNA提取,虽然它不是直接的致癌物质,但主要成分为苯酚,且提取过程需要添加氯仿,因而也具有一定的危险性。Vazyme推出无需氯仿的“FreeZol”试剂,采用独特、无毒稀释液DBBuffer代...
荧光定量PCR实验方法和应用介绍
(1)目前最常用的RNA提取方法就是trizol法,具有极强的裂解能力,可以在短时间内充分裂解细胞或者组织样本,保持RNA的完整性,有效抑制RNA的降解;目前市面上还有很多成品的常用RNA提取试剂盒,均是如此原理。2.具体步骤(1)拿出冻存组织或者新鲜组织,称重,充分液氮研磨;(2)加入1mltrizol或者其他成品裂解液,充分混匀...
如何提取高质量的RNA和DNA?
在提取和纯化RNA/DNA过程中,需要去除可能存在的污染物,如蛋白质、盐等,并尽可能地减少DNA和RNA的降解。此外,在进行RNA/DNA浓缩时,应根据实验要求选择合适的方法,如酚/氯仿法或柱层析法等。5.对提取的RNA/DNA进行检测和评估在提取RNA/DNA之后,需要对其进行确定性和质量评估。可以使用分光光度计和凝胶电泳等技...
RNA的提取与提纯
此步骤的目的是将沉淀的RNA洗干净。五、加入DEPC水中溶解将最后的沉淀溶解于DEPC水中,一般加入30~100μL的DEPC水,可用枪头吹打,促进RNA的溶解,完成整个RNA的提取。最后可将样品保存在-20℃或-80℃。
RNA提取又失败了,咋肥四?
目的研究基因的表达和调控时,需要从组织或细胞中分离纯化RNA。RNA质量的高低常常影响RT-PCR、cDNA库构建和NorthernBlot等分子生物学实验的成败。主要试剂Trizol是一种新型总RNA抽提试剂,内含异硫氰酸胍等物质,能迅速破碎细胞,抑制细胞释放出的核酸酶。
高通量测序之RNA提取那点事~~
2.氯仿在RNA抽提过程中的作用苯酚对蛋白质的变性作用远大于氯仿,但是酚的比重略比水重,碰到高浓度的盐溶液,离心后酚相会跑到上层,不利于含RNA的水相的回收;但加入氯仿后可以增加比重,使得酚/氯仿始终在下层,方便水相的回收;另外酚与水有很大的互溶性,如果单独用酚抽提,抽提后仍有大量的酚溶解到水相中,其会抑...
RNA提取的操作步骤、注意事项和常见问题分析
RNA的提取准备试剂:氯仿,异丙醇,75℅乙醇,无RNase的水或0.5℅SDS(溶液均需用DEPC处理过的水配制)操作步骤:1.匀浆处理:a.组织将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1mlTRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzoRNA的提取准备试剂:氯仿,异丙醇,75℅乙醇,无RNase的水或0.5℅SDS(溶液均需...
【醉翁之艺】血浆microRNA-221-3p可以作为非心脏手术后预测POCD的...
根据制造商的说明,使用TRIzolLS(Invitrogen,美国)从血浆样品中提取总RNA:在750μLTRIzolLS中加入250μL血浆样品,混合均匀后;加入200μL氯仿,混合均匀,12000g,4℃离心15分钟,然后取上清(上清液为含RNA的水相)转移至新EP管中,加入0.5mL异丙醇,混合均匀以沉淀RNA。将沉淀用1ml,75%乙醇洗涤两次,重悬于10–...
治疗预防兼具,卫生事件的“特效药”中和抗体商业化价值有多大...
通过这种方式筛选的中和抗体都有自己各自的特点,由于各研究团队接触的患者各不相同,再加上患者间具有基因多样性,两个团队筛选出相同抗体的可能性非常小。在实际操作中,从康复患者体内提取B细胞的时间点是一个重要因素。相对晚一些的采样时间,能够给予中和抗体足够的亲和成熟时间,Vanderbilt大学团队的研究表明,患者出现...
iMeta|俄亥俄州立大学郑庆飞组发表多组学方法研究肿瘤微生物组综述
然后,使用细胞分选仪将含有单细胞扩增DNA的珠子分选到标准PCR板中,随后再扩增到单细胞扩增基因组(SAG)文库中。微流控液滴发生器已用于在琼脂糖凝胶珠中培养小鼠肠道微生物,这是一种基于SAG-gel平台的典型单细胞测序方法(图3A)。被包封的单一微生物也可以直接裂解,然后进行DNA扩增或RNA逆转录和条形码标记。对于单...