iMeta | 北大深圳医院桂耀庭组揭示弱精子症患者精浆微生态的动态...

本部分采用十六烷基三甲基溴化铵和十二烷基硫酸钠(CTAB/SDS)法提取样品的基因组DNA,并使用附有唯一条形码特异性引物(341F:CCTACGGGRBGCASCAG;806R:GGACTACNNGGGTATCTAAT)进行基因的扩增。基因扩增产物通过Qiagen凝胶提取试剂盒(28704,Qiagen,Germany)进行纯化。随后,测序文库按照NEBNext??Ultra??IIDNA文库制备...

昆明铁路公安局2024年-2025年度DNA试剂耗材定点采购项目公开招标...

项目概况昆明铁路公安局2024年-2025年度DNA试剂耗材定点采购项目招标项目的潜在投标人应在云南中招招标有限公司业务部(昆明市五华区王筇路176号绿地创海大厦21层)获取招标文件,并于2024年09月03日09点30分(北京时间)前递交投标文件。一、项目基本情况项目编号:YNZZ202408-258项目名称:昆明铁路公安局2024年-...

PCR反应的几大要素(各组分和条件)

SDS的主要功能是:溶解细胞膜上的脂类与蛋白质,因而溶解膜蛋白而破坏细胞膜,并解离细胞中的核蛋白,SDS还能与蛋白质结合而沉淀;蛋白酶K能水解消化蛋白质,特别是与DNA结合的组蛋白,再用有机溶剂酚与氯仿抽提掉蛋白质和其它细胞组分,用乙醇或异丙醇沉淀核酸。提取的核酸即可作为模板用于PCR反应。一般临床检测标本,可采...

《食品科学》:四川农业大学刘书亮教授等:丝状真菌降解拟除虫菊酯...

如瑜志强等对米曲霉(Aspergillusoryzae)M4产3-PBA降解酶进行研究,提取了米曲霉的胞内酶和胞外酶粗酶液,发现胞内酶比胞外酶对3-PBA有更强的降解能力,对胞内酶进行了酶学性质分析,结果发现pH值和温度可显著影响降解酶的酶活力和酶稳定性,且该酶在pH7.0、30℃时有最高的酶活力。

实验与培训|技能提升:DNA的粗提取与鉴定(文末有奖)

1、研磨液中的变性剂SDS是去污剂的主要成分,能溶解细胞膜,促使细胞破裂,释放出DNA,并使得蛋白质变性,抑制植物材料中DNA酶活性;NaCl利于提取时DNA溶解在研磨液中;EDTA是一种金属离子螯合剂,螯合金属二价阳离子,降低DNA酶活性,减少DNA分解;Tris是缓冲液的主要成分,稳定溶液pH值,防止DNA在pH发生变化时降解或变性。

SDS碱裂解法小量提取小麦基因组DNA

2、向离心管中加入600ml的DNA提取缓冲液S,振荡充分混匀,65℃水浴30min,其间温和混匀几次;提取缓冲液“S”配制:100mmol/LTris-HClpH8.0100mmol/LNaCl50mmol/LEDTApH8.02%SDS3、加入等体积的酚-氯仿(V/V=1:1)温和混匀,8000rpm,4℃离心10min;...

傻傻分不清?DNApull-down来啦!

DNApull-down实验首先针对靶标区域设计特异性DNA探针,探针经过脱硫生物素标记,跟偶联在磁珠上的链霉亲和素结合;细胞核提取物与磁珠-DNA探针孵育,作用蛋白质分子可以和DNA探针特异性结合;纯化出与靶DNA片段结合的蛋白复合体,经过洗涤可以将非特异性结合蛋白质去除;最后,经洗脱液洗脱,得到目的DNA探针-蛋白质复合物,再...

人用重组DNA制品质量控制技术指导原则

应用不含目的基因的生物体粗提物,即不含产品编码基因的生产用细胞,制备上述试验使用的多克隆抗体。可通过对产品的直接分析方法(如杂交技术法)检测宿主细胞的DNA水平,和/或通过标记实验(实验室规模)检测证实通过纯化工艺能去除核酸。对于有意导入的病毒,应验证生产工艺中去除/灭活病毒的能力。

质粒提取实验:碱裂解法提取方案

又由于高盐条件也会导致SDS形成沉淀,而5mol/L的醋酸钾本身就是高盐溶液。利用高盐环境促进沉淀的原理,有时也可以利用l0mol/L醋酸铵来代替。优点碱裂解法在提取质粒时具有一箭双雕的作用:一方面是将细胞裂解,另一方面是形成高碱性的环境,使染色体DNA和质粒DNA变性,为下一步质粒DNA的复性及与染色体DNA分离做准备...

阳光德美 | 创新药物研发中生物标志物的生物分析策略

首先需要确定生物标志物的应用目的,比如是否是作为探索性指标、主要终点指标或次要终点指标。若生物标志物作为探索性指标,数据用于支持药物研发早期阶段如候选物选择、内部决策、概念验证时,则进行开发或探索性的方法性能进行确认,或者进行方法的部分验证即可,可以根据需求制定合适的验证内容。若生物标志物作为主要终点指标或...