工具鼠繁育险些闹出「大乌龙」?Cre-lox 原理与应用要点全在这了
实验室之前为Cre杂合鼠和Floxed杂合/纯合鼠闹过大乌龙事件,知道这两步快速搞定!师兄1)获得带有Cre的Floxed杂合小鼠。2)将第一步所得鼠与Floxed纯合小鼠交配,1/4概率获得目的小鼠(Cre阳性且Floxed等位基因纯合)。无论是组织/细胞特异性基因敲除,还是对特定细胞进行荧光标记,都离不开Cre...
鼠博士吐血整理:条件性基因敲除小鼠使用注意事项
作为高分paper的必杀器条件性基因敲除小鼠(flox)是相对于全身性基因敲除即普通基因敲除小鼠来说的,指的是将某个基因的敲除限制于小鼠某些特定类型的细胞或发育的某一特定阶段,实现对小鼠基因组的时空特异性敲除。最近不管是线上还是线下平台老师们咨询我们条件性敲除的问题特别多,今天鼠博士就来给大家总结一下使用条...
【陈巍学基因】视频130:发现和确认 TLR9 通路在记忆形成过程中的...
之所以搞这种目标基因两侧加loxP位点的转基因小鼠,而不是从小鼠胚胎开始,就直接从基因组中敲掉目标基因,就是因为某些基因是动物的必需基因,彻底敲掉这些基因,可能动物就死了。而用Cre酶来进行敲除,就可以通过在动物的特定器官、特定时间,注射带Cre酶基因的病毒,来达到在特定的器官组织中、在特定的时间点,敲...
Immunity:清华大学祁海团队发现保护B细胞免疫记忆的关键因子
为了探究ZFP318在记忆B细胞中的潜在功能,研究团队构建了一个独特的ZFP318小鼠报告/敲除模型(Zfp318-loxP-STOP-loxP-DTR-2A-tdTomato,ZSDAT)。这一小鼠在ZFP318基因原位敲入了红色荧光蛋白(tdTomato)和白喉毒素受体(DTR)的编码序列,当和生发中心特异表达的AID-cre小鼠交配后,后代小鼠既可以用来做tdTomato荧光示踪(表...
2024合成生物学竞赛常规赛队伍专题之ZJU-China团队
首先是基因表达调控领域——结合条件性启动子驱动的Cre酶基因表达,可以在特定发育阶段或组织中开启或关闭基因的表达。例如,在研究脑部疾病时,可以利用神经元特异性Cre小鼠来控制仅在神经系统中敲除或激活基因。其次Cre-LoxP系统也可用于染色体重排模拟领域——利用Cre-LoxP系统可以在细胞或动物模型中模拟人类疾病相关的染...
脑声常谈丨浅析双相情感障碍动物模型及行为评价
条件性基因敲除动物模型:Ank-GcKO小鼠模型ANK3基因编码Ankyrin-G蛋白,是全基因组关联研究(GWAS)较早得出的与BD相关的基因之一,研究推断ANK3基因可能通过多种机制参与BD的发病(www.e993.com)2024年11月17日。Ank-GcKO小鼠是将Ank3flox小鼠(Ank3flox/flox)与Camk2a-Cre小鼠杂交后得到的。通过Cre-loxP基因编辑技术,Ank-GcKO小鼠纯合子成年后前...
Nature | 哺乳期母体骨质流失的救星:母体CCN3激素在骨代谢调控中...
通过基因敲除、并体实验和骨移植实验,证实了弓状核(ARC)中的雌激素受体α(ERα)敲除后,体内存在一种能够显著增加骨量的循环因子,这种因子能够通过刺激骨骼干细胞的活性,促进骨形成(Credit:Nature)基因敲除与骨量变化:使用AAV2-Cre病毒介导的ERα敲除模型,发现敲除ERα的弓状核(ARC)区域的小鼠表现出显著的骨量增加...
Science突破!丨 14种Cre谱系追踪揭示肝脏再生的细胞来源
此前由于缺少能够标记肝小叶不同细胞类型的工具鼠,人们很难全面评估肝脏不同细胞群的再生能力。Zhu研究组的研究人员利用CRISPR-Cas9技术,将IRES-CreERT2整合到不同肝区域特异基因的3’-非翻译区,从而构建了11种标记肝小叶不同区域的转基因小鼠。该研究组还从JacksonLaboratory引入了3种已有的CreER小鼠,其中包括特异...
真没想到,用了「它」不到1个月就拿到了基因敲除小鼠!
一、基于工具病毒和flox鼠获取基因敲除鼠当我们具有flox鼠时,我们可以构建表达Cre的工具病毒载体(AAV、慢病毒等),通过将工具病毒注射到flox鼠体内在全身或局部组织表达Cre,从而获得全身或组织特异性的基因敲除鼠。2019年美国乔斯林糖尿病中心研究团队在PNAS上发表的文章中就应用了该策略[1],作者...
一小时包教包会!Cre工具鼠系统在实际应用场景中的问题与思考
根据国际小鼠表型项目联盟(IMPC)统计,超过30%的小鼠基因敲除后胚胎致死或出生后不久死亡。而Cre-loxP系统的建立,不仅可以用于具有胚胎致死性目的基因的研究,还为实现大小鼠条件性靶基因功能研究,提供了有效工具。LoxP位点的重组效率低,容易重组失败?Cre没在目的组织表达反而在非目的组织中表达了?如何验证一个新的Cre...