上新| HCD检测,快准稳!复杂样本轻松应对,申报无忧
ResiDNAPrecise系列采用大预混思路,将检测所需的引物、探针、ddH2O与qPCRMix提前预混,仅需加入样本即可进行检测,降低加样误差的同时减少试剂损耗和外源污染,提高实验效率。检测结果准确,扩增效率高1.参考品采用国家标准品标定以Vazyme#RD202为例,试剂盒中的参考品采用国家CHODNA标准品标定,检测值偏差小于5%...
《食品科学》:陕西科技大学李国梁教授等:微生物源示踪技术在食品...
以表现型为基础的数据库方法主要包括微生物抗生素抗性指纹分析、脂肪酸甲酯分析及碳源利用等;以基因型为基础的数据库方法主要包括核酸印迹法、脉冲电场凝胶电泳、扩增片断长度多态性分析、重复序列扩增法、多位点序列分型法、基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱等,利用这些方法判别粪便污染来源。以常用判别分析法的同源相似...
干货| CT值大原因速查,qPCR 实验优化三步走
引物符合引物设计原则,避免出现非特异性扩增,注意引物扩增效率需在90%-110%之间;引物扩增效率的计算将基因扩增产物进行梯度稀释(至少三个梯度)同时进行qPCR,得到的CT值仪器会自动拟合标准曲线,或将CT值导入Excel中手动绘制标准曲线,将标准曲线中的斜率带入引物扩增效率的计算公式:e=10[??1/k]-1(...
qPCR结果异常原因分析及解决方案|探针|荧光|信号|扩增|引物|qpcr...
问题分析:基因的扩增效率降低导致Ct值偏大;基因本身的转录水平低导致的Ct偏大;解决方法:可将基因的扩增产物进行梯度稀释,同时进行qPCR,将得到的标准曲线进行引物扩增效率的计算。通过标准曲线可以得到线性方程,将线性方程得到的斜率(K)带入扩增效率计算公式中:e=10[-1/k]-1;只有当扩增效率满足90~120%,且标准...
qPCR体系优化和常见问题分析
最常用的是10倍梯度稀释样品,采用标准qPCR程序进行扩增获得Cq值,最后根据各样品浓度及相应的Cq值绘制标准曲线,得到线性方程Cq=-klgX0+b,扩增效率E=10(-1/k)-1。利用qPCR进行定量分析时,要求扩增效率范围在90%-110%(3.6>k>3.1)。④反应体系优化...
Taq酶你选对了吗?
Taq酶的酶动力与扩增效率有关(www.e993.com)2024年10月23日。一般热启动Taq酶的酶动力越强,PCR扩增的指数增长期越长,‘S型’曲线更加典型,荧光信号值更高,而且更适合做多重PCR检测。酶动力弱的品牌DNA聚合酶一般只能支持2重反应,在做3重反应时,扩增曲线低矮,荧光信号值较低,无典型扩增曲线,结果很难判定。
基于自然杀伤细胞的癌症免疫疗法研究进展与前景
该方法可达到15000倍以上的扩增效率,纯度可达100%。来自脐带血的CD34+造血祖细胞用补充有多种细胞因子组合的新型临床级培养基扩增,可制备出表达NK细胞受体且能有效杀伤肿瘤细胞(包括白血病和实体瘤)的功能性CD56+NK细胞。使用无外源性基质细胞、多种细胞因子组合(包括IL-3、IL-7、IL-15、SCF和Flt3L)诱导培养的...
做qPCR,不要钻进“唯Ct值”的牛角尖!
理想情况下,qPCR的模板经过一定的循环数进行指数扩增,扩增循环数和产物量之间的关系是:扩增产物量Cn=起始模板量C1×(1+扩增效率E)^循环数n。但是由于E通常无法达到100%,并且在扩增的后期,扩增效率会逐渐降低,只有在理想的情况下才满足Cn=C1×2^n,即Ct值差1,初始浓度差2倍。
师姐支招!qPCR 数据也可以 10 分钟搞定,只用 2 个指标...
2.计算相对表达量,这个表达量是相对于每个靶标的对照组而言,因此用对照组Cq值的平均值减掉处理组中每个样品的Cq值,即为??Cq,扩增效率为标准曲线得到的E;3.计算均一化的相对表达量。用目的基因的相对表达量除以均一化因子(如有多个参照基因,均一化因子即为其相对表达量的几何平均数);...
qPCR效果好不好,这6个要素要知道~
1.扩增效率及相关系数良好的PCR扩增是指数级的,理论上以100%的效率进行,但实际上并不是所有的PCR反应都表现出相同的高效率,所以需要验证实际的扩增效率E。当计算评估PCR扩增效率时,至少需要做3次平行重复,并至少做5个数量级倍数(5logs)连续梯度稀释模板浓度,得到线性方程Cq=-klgX0+b、扩增效率E=10(-1/k)...