和元生物获得发明专利授权:“一种提高大肠杆菌裂解过程中质粒稳定...

具体步骤如下:1)菌体重悬,所述重悬液含二糖类化学物质;2)碱裂解;3)中和;4)澄清;5)浓缩换液;6)分子筛层析;7)制剂换液。本发明的工艺简便,通过在菌体重悬液中添加一定浓度的二糖(如蔗糖、海藻糖等),保护大肠杆菌碱裂解过程中的超螺旋质粒,进而简化下游层析纯化工艺,并提高质粒回收率,方便快捷,适于推广应用。

Nature Catalysis丨合成甲基营养大肠杆菌用于甲醇的生物转化

从在生物反应器条件下观察到的MEcoli_ref_2的表现来看,作者认为合成的甲基营养大肠杆菌可以适用于精密发酵工艺。事实上乳酸、衣康酸、PABA、PHB之前已被发现可以由其他生物产生。这里合成的甲基营养大肠杆菌作为一种新的模式生物用于转化甲醇,从经济可行的角度来看,浓度、产量和效率还需要大幅提高。未来工作会是优化生产...

...安徽工程大学张琴教授等:过表达去饱和酶基因对大肠杆菌脂肪酸...

将重组质粒转化至BL21(DE3)得到工程菌株BL21(DE3)/pET-de1(DE1),BL21(DE3)/pET-de2(DE2)及共表达菌株BL21(DE3)/pET-de(DE),对工程菌株进行PCR检测、质粒及酶切验证,序列比对结果显示工程菌构建成功。3工程菌株DE1、DE2、DE去饱和酶基因诱导表达产物的SDS-PAGE分析对工程菌株DE1、DE2、DE去饱和酶基...

如何应对抗生素耐药性?借助反向疫苗学开发的新一代疫苗,或有意想...

重组蛋白,如在大肠杆菌中产生的重组蛋白,需要从粗裂解物的混合物中提纯,这一过程昂贵且耗时。亲和标签是特定的蛋白质或多肽,可以附着在重组蛋白的N-末端或C-末端,以帮助其纯化。一种常用的方法是将重组蛋白与谷胱甘肽S转移酶(GST)或多组氨酸(His)标签融合,通过亲和层析进行纯化。在大多数革兰氏阴性细菌(如大肠杆...

综述:细菌群落中抗菌药物耐药基因的水平转移

OMVs可以封装染色体和质粒的DNA片段及RNA,从而促进遗传物质的转移。OMVs可以吸收由自溶细胞释放的胞外DNA,或细菌可在OMVs脱落前将DNA打包进OMVs。已在大肠杆菌和鲍曼不动杆菌等物种中证明,OMVs可以进行DNA的水平转移,也可作为物种间DNA转移的手段。纳米管是细菌间的一种主要交流方式,提供了一个网络用于交换细胞内和...

mRNA疫苗超全知识汇总,看这一篇就够了!

第三代疫苗:是重组病毒载体疫苗和核酸疫苗,重组病毒载体疫苗是将病毒中能够诱导合成具有免疫原型的蛋白质或亚单位的基因片段嫁接到没有致病性或致病性极低的病毒中,该载体病毒携基因片段进入人体,就能够诱导免疫反应的发生;核酸疫苗又称基因疫苗,包括DNA疫苗和mRNA疫苗,核酸疫苗是将决定病毒或细菌免疫原性的遗传物质直接导...

“双非”高校,唯一单位发Nature Sustainability!|活性|催化剂|...

作者使用大肠杆菌细胞来进行研究,因为它们含有具有电催化ORR活性的膜间细胞色素c蛋白。为了提高细胞色素c的浓度和细胞外界面电子转移效率,作者采用了基因和纳米工程手段。将含有编码cytc蛋白的torY基因的质粒转入野生型(WT)细胞,以获得工程型(ET)细胞(图1)。在质粒中,强T7启动子导致ET细胞中的cytc转录和翻译率高...

质粒转化大肠杆菌

1.重组质粒的鉴定。当质粒的重组或其它载体重组后,通常会发生质粒的重组失败,包括质粒的自身环化。因而要求进行筛选,把重组成功的质粒找出来。在目前常用的质粒和其它载体中含有相应的抗生素抗性基因,一旦重组成功,质粒环化(包括自身环化),抗生素抗性基因表达,被转化的大肠杆菌便具备抗相应抗生素的能力,可以含该抗生素的培...

科研| NAT COMMUN:代谢组和蛋白质组分析揭示了工程大肠杆菌糖酵解...

3-磷酸甘油脱氢酶1(GPD1)催化DHAP转化为3-磷酸甘油(甘油-P),随后3磷酸甘油水解酶2(GPP2)催化甘油-P去磷酸化并形成终产物甘油。本研究中,我们将能够表达编码gpd1和gpp2两个基因的、同时缺乏甘油激酶基因(glpK)来防止甘油被重新作为碳源而利用的质粒导入到大肠杆菌中,构建了能够产甘油的大肠杆菌菌株,并将其定义...

生物质粒的规模化发酵生产

转自:楚天人近年来随着基因/细胞治疗的突破以及mRNA疫苗的火热问世,对质粒的需求和大规模生产的要求愈发迫切,因此质粒的规模化生产显得尤为重要。质粒DNA通常是在上游生物工艺中由大肠杆菌在发酵系统中生产,一般支持病毒载体和mRNA疫苗制造的质粒生产规模都在几十升至上百升,进行高密度发酵,对发酵生产设备要求较高。大...