干货| CT值大原因速查,qPCR 实验优化三步走
非特异性扩增消耗引物和Taq酶,会降低引物与目标基因结合概率,从而影响扩增效率。优化方式引物符合引物设计原则,避免出现非特异性扩增,注意引物扩增效率需在90%-110%之间;引物扩增效率的计算将基因扩增产物进行梯度稀释(至少三个梯度)同时进行qPCR,得到的CT值仪器会自动拟合标准曲线,或将CT值导入Excel中...
技术干货 | 实时荧光定量(qPCR)知多少
是在荧光扩增曲线指数增长期设定的一个荧光强度标准(即PCR扩增产物量的标准)。荧光阈值可以设定在PCR扩增的指数期。05阈值循环数表示每个PCR反应管内荧光信号达到设定的荧光阈值所经历的循环数,研究表明,各模板的CT值与该模板的起始拷贝数的对数存在线性关系,即起始拷贝数越多,CT值越小;起始拷贝数越少,CT值越...
是什么样的核心技术,使我国面对新冠病毒时,迅速研发出核酸标准...
二是利用数字PCR(dPCR)让DNA分子变得“可数”。数字PCR核酸检测是基于高通量样品分配,单分子扩增,以及基于泊松分布公式统计原理,无需标准曲线,直接实现核酸拷贝数定量,逐渐被国际计量领域认可为一种基因绝对定量的方法。我们通过方法优化不断提高扩增效率,消除由于单拷贝扩增失败导致的假阴性dPCR结果,并且通过多种不...
《AFM》柏林自由大学李文忠:热敏水凝胶作为微孔用于诱导多能干...
它们的扩增效率分别在培养3天和4天后分别达到4.9倍和7.2倍。由于完全化学定义的特性,这种3D培养系统可以提供iPSC,没有任何繁殖限制和病原体和免疫原性转移的风险,这些风险可能是由应用传统的定义不明确的动物源性基质或细胞衍生物引起的。因此,它展示了iPSC在下游生物医学应用中保持其全部潜力的巨大...
做qPCR,不要钻进“唯Ct值”的牛角尖!
扩增效率Efficiency(E):通常要求在90%~110%。效率低于100%,是由于PCR反应中存在抑制因素;而高于100%可能一些污染、非特异性扩增或者是引物二聚体造成。斜率Slope:当扩增效率为100%时斜率为-3.32,当90%-110%时的斜率为-3.58~-3.10。3、Ct值与模板拷贝数的关系...