2024 WCLC | 优化NGS检测MET扩增“起跑线”,助力MET精准诊疗新飞跃
图1.(A)ROC曲线展示NGS检测MET基因扩增的性能;(B)不同METGCN阈值区分MET+与MET-患者的特异性、敏感性和准确性;(C)ROC曲线显示在验证队列中,NGS检测的最佳阈值为6.55;(D)Kaplan-Meier曲线显示,在NGS检测下METGCN≥6.55(阳性)的患者接受MET靶向治疗后的无进展生存期长于METGCN<6.55(阴性)的患者;(E)直方图...
过年亲手放过的烟花,在师妹的 qPCR 扩增曲线上复现了
正常的qPCR扩增曲线应为S型,理想的CT值范围在20~30。若出现CT值偏大、无平台期或平台期下降等异常情况,可尝试以下调整:●若CT值偏大,可能是模板量不足或基因表达丰度低,建议增加模板量并观察CT值是否按预期倍数减少。●考虑qPCR反应条件或引物设计可能不合适,导致扩增效率降低。此时,...
qPCR 曲线「丑」到拿不出手!除了引物,这些问题也要注意
3.qPCR扩增曲线异常:正常扩增曲线应呈平滑S型。常见异常包括扩增曲线锯齿状(RNA浓度低或体系含有杂质);无法到达平台期(模板浓度太低,循环数太少或扩增效率低);除了CT值、扩增曲线异常,我们还常遇到RNA降解、引物特异性差等各种问题!报名本次直播,带你从实验流程出发,聚焦qPCR疑难问题、实验技巧...
国产PCR核酸扩增仪10月热度榜(下),采购必备
Cepheid??GeneXpert??DxSystem全自动医用PCR分析系统(GX-IVR2)是全自动一体化的核酸检测系统,可搭载1-4个独立的反应模块,采用非常经典的荧光定量PCR(qPCR)技术和微流控技术,将繁琐的核酸检测过程精简为“样本进,结果出”的简单操作,同时又保证了专业实验室水准的检测性能,定义了非专业场景下开展核酸检测的...
师弟一举赢得 qPCR 「最美」曲线,暗藏哪些小心机?
1.熔解曲线出现杂峰:1)杂峰在主峰之前,说明存在引物二聚体,建议需要重新设计引物。2)杂峰在主峰之后,大多由非特异性扩增引起,建议调整稀释倍数、减少引物。2.扩增曲线抖动,不光滑或没有平台期可能因为仪器不准或模板不纯。建议进行仪器校准;增大模板稀释倍数。
揭开“内标”未出之谜
内标有两种形式,一种是使用天然样品中含有的内参基因作为内标,称为内源性内标,另一种是人工添加的内标称为外源性内标[2],如果内标无扩增曲线,则通常提示实验环节存在问题,该标本实验无效(www.e993.com)2024年10月23日。本案在查看结果时发现有两个样本内标未出,逐一排查多个影响因素后,并最终找到内标未出原因,使内标重出江湖,顺利发出结果。
如何解析新冠核酸检测中的异常扩增曲线?
(1)采取手动调整基线的方法,重新定义基线即可正常(即将基线起点改为荧光信号稳定的循环数,基线终点设置成扩增曲线起峰的前一个循环数)。(2)重新提取样本、重新配置试剂(可采用不同厂家试剂检测),注意人员操作。(3)稀释模板重新扩增。2.扩增曲线不平整,有向上或者向下的尖峰...
大规模新冠核酸筛查中出现的异常扩增曲线分析
仪器的自动基线设定为6-12循环,因样本病毒核酸载量高,扩增曲线起跳早,位于或早于基线循环处,导致曲线异常。3解决方案:该类型曲线需手动调整基线范围,将基线设定前移至合适循环,重新分析。3小“S”型1曲线特点:曲线呈现出不典型的“S”型,有极短的对数扩增上升期,后进入平台期,荧光强度高于阈值,但远...
qPCR扩增曲线的自述
我是扩增曲线,来自荧光定量PCR,是用于描述qPCR动态进程的曲线,我有两种形态,一种是线性图谱:横坐标是循环数,纵坐标是荧光强度值;另一种是对数图谱:横坐标是循环数,纵坐标是荧光强度值的对数。大家根据我来确定Cq值,最终确定初始模板的含量。新冠疫情以来,我可是发挥了重要的作用,诊断技术的金标准,骄傲的很呢。