气死!老板说做完克隆就放假,我两眼一睁就是 p,却颗粒无收

复孔重复性差可能是加样操作的问题;而基因克隆需要用高保真酶来确保扩增片段的准确性,常规的DNA聚合酶达不到这么高的要求。师姐可以试一下我最近免费申请的即用型超保真PCR预混试剂,使用时只需加入DNA模板和引物,最大限度地减少人为误差,而且可以确保扩增片段的准确性!师姐为了给广大科研用户的实验保...

信得科技检测团队在中科院Top期刊《Poultry Science》上发表最新...

重组质粒pts-11和pnon-ts-11分别克隆有ts-11株和非ts-11株的potC部分基因,由宝生物工程(大连)有限公司合成。CycleaveqPCR反应程序CycleaveqPCR反应体系为25μL,包括12.5μL的CycleavePCRMix(2×Conc.),上游引物(10μM)和下游引物(10μM)各0.5μL,ts-11探针(5μM)和非ts-11探针(5...

PCR反应的几大要素(各组分和条件)|摩尔|扩增|引物|pcr|聚合酶|dna...

长序列引物(如,>50nt)或碱基经修饰的引物通常需要进行纯化,以去除非全长产物和未结合的核苷酸。对于分子克隆和突变等应用,建议将引物进行纯化,序列和长度的完整性对于实验的成功至关重要。为PCR克隆设计引物时,可在5'末端引入限制性酶切位点、重组序列和启动子结合位点等延伸的非模板序列。这些延伸序列需进行...

snapgene(引物设计软件)下载 v1.1.3官方版

??使用您自己的引物模拟标准PCR,或允许SnapGene自动设计它们??专门的克隆工具可确保所有主要分子克隆的快速准确构建设计技术限制性克隆限制性克隆是一种常用的克隆技术,其中使用限制性酶来制备插入片段和用于连接的载体。Gateway??克隆质粒可以在没有限制酶的情况下使用Gateway克隆构建,通过重组插入...

PCR 引物设计图文详解,一看就会

值得一提的是,各种模板的引物设计难度不一。有的模板本身条件比较困难,例如GC含量偏高或偏低,导致找不到各种指标都十分合适的引物;用作克隆目的的PCR,因为产物序列相对固定,引物设计的选择自由度较低。在这种情况只能退而求其次,尽量去满足条件。做RealTime时,用于SYBRGreenI法时的一对引物与一般PCR的引物,在...

上海交大张宇团队设计新型引物助力海沟微生物多样性检测

与传统通用引物相比,新设计引物在马里亚纳海沟沉积物样本中检测到更多稀有古菌和细菌类群本研究中,基于克隆文库技术,研究者利用来自马里亚纳海沟的沉积物样本,分别构建了396条古菌和1868条细菌16SrRNA基因全长序列(www.e993.com)2024年11月19日。并进一步根据PDFaith和MNTD系统发育分析证明了V3–V4区域为海沟沉积物微生物群落中最具代表性的16S...

功能基因克隆的基本策略与引物设计原则

1功能基因克隆的基本策略①根据已知的脊椎动物某一特定基因的氨基酸序列的保守区域设计简并引物,利用RT-PCR技术获得该基因的核心片断,将该片断分离纯化后与T载体连接,转化大肠杆菌,挑取白色菌落,经PCR反应鉴定得到阳性克隆,送阳性克隆的PCR产物去测序,从而获得目的基因的cDNA核心片断的序列。

技术|单克隆抗体制备方法的前世今生

d.使用逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）和抗体特异性引物鉴定单B细胞分泌抗体的特异性；e.扩增特异抗体基因；f.将抗体基因克隆到表达载体中，并在细菌或细胞系统中表达；g.纯化表达产生的抗体，并用ELISA等方法进行评估。单B细胞抗体技术现在已广泛用于人和小鼠单克隆抗体生产，如一些治疗性中和单抗，可用于治疗多种...

常用生物学软件的安装与应用(六)—Oligo7

对于Oligo7,小编觉得用起来并不友好,连复制粘贴引物序列的选项都没有,有点不够人性化。(3)SnapGene的优势其实不在于引物设计,而是用于分子克隆,在构建载体时会非常实用。(4)总结一下,普通PCR引物设计的优先选择顺序为Primer-BLAST/Primer3>Primer6>Oligo7>SnapGene>DNAMAN,分子克隆引物设计优先使用SnapGene。

RACE专题 | 掌握这些tips,RACE实验顺风又顺水!

阳性克隆鉴定:菌落/菌液PCR鉴定推荐使用2×TaqMasterMix(DyePlus)(Vazyme#P112)或其他等效产品。测序分析:选取经鉴定的阳性单克隆进行一代测序鉴定,测序引物可选择载体通用引物或自行设计引物(推荐至少挑取8-10单克隆进行测序)。RACE试剂怎么选?