基因工厂云探秘系列2--免费序列优化,提升载体构建成功率 解锁高效...

北京2024年9月12日/美通社/--载体构建是蛋白表达等很多实验的起点,也许你知道可以通过优化启动子、调整表达载体、选择合适的宿主细胞、控制培养条件等来提高蛋白表达量,但你是否关注过密码子优化这个关键步骤呢?当遇到片段扩增失败,或载体难构建的情况,也许你会不停优化引物设计、或更换试剂,你是否知道可以通过序列...

气死!一周的载体构建,我却做了两个月,问题出在哪

引物设计不特异,退火问题不当等:优化PCR反应体系;设置梯度降温程序。2.测序文库制备失败基因组DNA提取不当,质量不高;cDNA合成时,样本起始量低;所用试剂效率低。3.质粒构建失败1)载体酶切不完全酶切缓冲液不合适:建议使用随酶配套的缓冲液;若DNA溶液中盐浓度较高,可提前纯化DNA,控制DNA...

...棘孢木霉天冬氨酸蛋白酶基因的克隆表达及其对大豆分离蛋白的水解

1asp基因的克隆和序列分析将提取的棘孢木霉总RNA反转录成cDNA,以cDNA为模板,采用引物F和R进行PCR扩增,获得的产物片段与预期大小一致(图1)。PCR产物经纯化后连接至pEASY-Blunt载体上,转化至大肠杆菌DH5α菌株中,挑取阳性克隆子进行测序。测序结果表明,克隆的asp基因具有完整的开放阅读框,长度为1359bp,编码453个氨...

国自然撰写:经典分子机制研究(一)|位点|质粒|扩增|dna|rna|聚合酶...

2.2.1构建转录因子A真核表达载体将编码转录因子A的基因序列连入真核表达载体pcDNA3.1(+)后经酶切鉴定,出现了_bp目的条带,结果与前期设计相符,证明在真核表达载体中插入了相应的转录因子A蛋白编码序列,命名为pcDNA3.1-转录因子A。2.2.2转录因子A上调基因B的转录表达2.2.2.1体外证实...

snapgene(引物设计软件)下载 v1.1.3官方版

??直观的技术可识别克隆程序中的设计缺陷,以便进行更正??使用您自己的引物模拟标准PCR,或允许SnapGene自动设计它们??专门的克隆工具可确保所有主要分子克隆的快速准确构建设计技术限制性克隆限制性克隆是一种常用的克隆技术,其中使用限制性酶来制备插入片段和用于连接的载体。

讲座预告 | 载体构建&逆转定量实验成功指南,包教包会我说的!

PCR&克隆产品线产品经理赵春丽qPCR产品线产品经理潘佳慧与大家交流赶紧搬好小板凳一起get行业干货吧!本期课程介绍载体构建是研究基因功能的重要手段,广泛应用于基因治疗、新药开发及优良品种繁育(www.e993.com)2024年11月18日。载体构建方式多种多样,大家也许有以下困惑:不同方式异同点是什么?哪种更适合自己?怎样快速高效的完成研究?因此,...

需要挑取更多的最终菌落克隆进行筛选鉴定,以排除非重组的载体

解决方案：用相同基因型或尽可能接近的克隆重复检测(见步骤1)。如果12个克隆均没有通过检测，那么在Gateway克隆反应中使用Y值最高的克隆，请记住，需要挑取更多的最终菌落克隆进行筛选鉴定，以排除非重组的载体。在这里，我们描述如何构建-一个如本章导言中图4-2所描述的可读框(ORF)的入门克隆载体，并将这个可读框...

真核表达载体pcDNA3.1-GFP的构建

原理引物中设计入限制酶位点:由于PCR引物的5'末端可以增加一些非互补碱基,因此可以在两引物的5'末端设计单限制酶或双限制酶切位点。这样得到的PCR产物用限制酶消化产生粘性末端,即可与有互补粘端的载体DNA重组。这种克隆方法效率较高,且当两引物中设计不同酶切位点时,可有效...

分子克隆技术全攻略

分子克隆(基因克隆/DNA重组/载体构建)技术在分子水平上提供一种纯化和扩增特定DNA片段的方法。常含有目的基因,用体外重组方法将它们插入克隆载体,形成重组克隆载体,通过转化与转导的方式,引入适合的寄主体内得到复制与扩增,然后再从筛选的寄主细胞内分离提纯所需的克隆载体,可以得到插入DNA的许多拷贝,从而获得目的基因的扩...

中国热科院在分子克隆领域标准化研究方面取得新进展

目标基因可以通过一步克隆反应直接连接到载体,避免了载体的酶切、回收过程。2.标准化。该套载体均具有NC克隆的通用接头序列,目标基因携带通用接头后可克隆到该系统任一载体,解决了不同载体需要重新设计引物和扩增基因的问题(图1)。这两个优点使得pNC载体系统适合高通量的载体构建。