过年亲手放过的烟花,在师妹的 qPCR 扩增曲线上复现了
正常的qPCR扩增曲线应为S型,理想的CT值范围在20~30。若出现CT值偏大、无平台期或平台期下降等异常情况,可尝试以下调整:●若CT值偏大,可能是模板量不足或基因表达丰度低,建议增加模板量并观察CT值是否按预期倍数减少。●考虑qPCR反应条件或引物设计可能不合适,导致扩增效率降低。此时,...
师弟一举赢得 qPCR 「最美」曲线,暗藏哪些小心机?
▼点击下方图片,即可报名学习▼课程抢先看:一.常见问题解析1.熔解曲线出现杂峰:1)杂峰在主峰之前,说明存在引物二聚体,建议需要重新设计引物。2)杂峰在主峰之后,大多由非特异性扩增引起,建议调整稀释倍数、减少引物。2.扩增曲线抖动,不光滑或没有平台期可能因为仪器不准或模板不纯。建议进行仪器校准;...
qPCR 曲线杂乱、重复性差?你可能忽略了这些点(含福利)
1.如何设计「好」引物?qPCR引物设计原则及注意点:引物设计跨内含子(防止非特异性扩增),注意不同转录本之间的差异,扩增效率在90~110%之间,引物特异性验证(Primer-Blast序列比对及溶解曲线分析);2.CT值异常分析:Ct值过大:可能是模板浓度低,扩增效率低或者体系存在PCR抑制物。应注意提高模板浓度,降低退...
大规模新冠核酸筛查中出现的异常扩增曲线分析
(1)第三方质控与扩增试剂不匹配;(2)错用不同品牌的质控品,扩增片段不同,与扩增试剂不匹配;(3)同一品牌不同批号的质控品混用,扩增片段可能存在批间差异;(4)质控品保存不当造成降解,或者处理不当造成基因片段浓度不均匀,如用前没有充分混匀。3解决方案:首先确认所使用的质控品是第三方质控品还是试剂盒自带...
新冠内标扩增反应曲线呈锯齿状,原因是……
图5复检标本的对照扩增反应曲线(A)为阴性对照;(B)为阳性对照;(C)为阳性质控;(D)为生理盐水对照。2.高灵敏快检仪复检:为保证报告时限,对2011号及2018号标本同时用检测限为200拷贝/mL的更灵敏的仪器做了快检,结果如图6所示。结果显示2011号及2018号标本内标均有扩增曲线,核酸检测结果为阴性。
收藏!PCR异常扩增曲线分析攻略
图一:使用不含ROX试剂,忘记更改PassiveReference结果图及更改后的结果图还有一些结果,多组分图扩增曲线没有抬升,是很明显的阴性样本,但是扩增图谱的扩增曲线抬升了,这样就会与阈值线相交,反而有了CT值(www.e993.com)2024年10月23日。这是由于软件在进行基线自动扣除的时候出现错误,引起了扩增曲线抬升(图二)。出现这种情况可以采取手动调整基线的方...
qPCR扩增曲线的自述
大家好!首先跟大家做一个自我介绍:我是扩增曲线,来自荧光定量PCR,是用于描述qPCR动态进程的曲线,我有两种形态,一种是线性图谱:横坐标是循环数,纵坐标是荧光强度值;另一种是对数图谱:横坐标是循环数,纵坐标是荧光强度值的对数。大家根据我来确定Cq值,最终确定初始模板的含量。新冠疫情以来,我可是发挥了重要的作用...
微生物扩增子测序图表解读(实例数据)
3.韦恩图韦恩图是对样本之间或分组之间的OTU进行比较获得。4.样品构成丰度4.1稀释曲线微生物多样性分析中如何验证测序数据量是否足以反映样品中的物种多样性?稀释曲线(丰富度曲线)可以派上用场。它是用来评价测序量是否足以覆盖所有类群,并间接反映样品中物种的丰富程度。
那么问题来了,qPCR又是什么?
(3)根据未知样品的CT值,即可在标准曲线中得到样品的拷贝数。图注:从扩增曲线获得标准曲线(来自网络)如上图可得,如果起始模板量浓度高,则可在较早的循环中观察到扩增,CT值小;如果起始模板量浓度少,则会在稍后的循环中观察到扩增,CT值大。对于标准品如何选择或者制备,标准曲线的绘制,请在其它学习平台搜索了解...
国家疾控局印发猴痘防控方案:密接者需进行21天健康监测
3.密切接触者管理。疾控机构或基层医疗卫生机构指导密切接触者做好自我健康监测,健康监测期限为最后密切接触之日起21天。密切接触者自我健康监测期间可正常生活与工作,需避免与他人发生性接触等密切接触,避免捐献血液等;坚持每天做好体温测量和症状监测,出现猴痘样症状应及时就诊并主动报告可疑接触史。辖区疾控机构或基层...