蛋白表达最常见的12个问题解析(上)
经过优化的基因序列往往能提高mRNA二级结构的稳定性,有利于新生肽段的正确折叠,提高外源活性蛋白的表达。。3.表达温度的选择大肠杆菌的最适生长温度在37~39℃之间,但此温度下极易生成包涵体蛋白,降低可溶性蛋白的表达,而低温培养条件下表达外源蛋白能有效地增加可溶蛋白的比例。4.诱导条件优化摇瓶培养时,...
Science后再发Nature!国际顶尖团队屡次在化学领域创新,令人震惊!
-蛋白质纯化:亲和层析、离子交换层析、凝胶过滤等层析技术的原理和实践等4、蛋白质不表达和包涵体问题-分析不表达的原因,优化诱导条件-改进溶解缓冲液条件,提高蛋白从包涵体中释放5、蛋白质活性鉴定-进行WesternBlot或酶活性实验验证蛋白质活性6、蛋白质结晶前分析-测定蛋白质的纯度、聚合状态、稳定...
...Reports | 刘平生团队报道鱼类肝脏脂滴的纯化及其蛋白质组…
图1鱼肝脏脂滴纯化及蛋白质组学分析流程及结果该研究首次以斑马鱼和鲫鱼作为模型动物,对鱼类肝脏脂滴进行了蛋白质组学分析,提供了鱼类肝脏脂滴蛋白的主要成分信息,可为后续以鱼为模型动物的肝脏和脂滴的研究提供参考数据。也为进一步认识脂滴的作用,为以鱼类为模型动物的肝脏代谢疾病研究提供依据。文章链接:doi:...
云南农业大学王雪峰副教授等:辣木籽ACE抑制肽的分离纯化、结构鉴定
该研究将以该酶解产物为研究对象,以ACE抑制率为评价指标,通过膜分离技术、强阴离子交换层析分离蛋白肽成分,通过高效液相色谱-串联质谱(HPLCMS/MS)结合生物信息学鉴定筛选出潜在的ACE抑制肽,利用分子对接进一步分析ACE抑制肽的作用机制,解析其二级结构特征及体外活性,旨在为辣木籽降压肽产品或相关功能性食品的开发利用提供...
汇集结构质谱尖兵,开拓蛋白质结构生物学的新天地——第十四届质谱...
近年来,化学交联质谱技术已逐渐成为蛋白质复合物解析的重要手段。它是利用化学交联剂将空间距离足够接近的蛋白质内/间的氨基酸以共价键连接起来,再利用质谱对交联肽段进行鉴定,进而实现蛋白质相互作用的组成、界面和位点的解析。现有化学交联技术主要用于解析体外表达纯化的或细胞裂解液中的蛋白质复合物,而在细胞内蛋白...
登上《细胞》封面!我国科学家解析叶绿体基因转录蛋白质机器构造
前述研究团队要研究的,正是叶绿体基因转录蛋白质机器的构造(www.e993.com)2024年7月24日。团队首先利用叶绿体转化技术构建了叶绿体转基因烟草,随后通过亲和纯化的方式获得完整的叶绿体基因转录蛋白质复合物,最终利用单颗粒冷冻电镜技术成功解析了叶绿体基因转录蛋白质机器构造。叶绿体基因转录蛋白质机器构造。受访团队供图...
中国科大首次解析人类溶酶体维生素B12外排蛋白ABCD4的电镜结构
作者经过大量的摸索,成功表达并纯化得到了状态良好的人类ABCD4蛋白,利用单颗粒冷冻电镜技术解析了该蛋白与ATP(三磷酸腺苷)结合状态的高分辨率三维结构,分辨率达到3.6埃(0.36纳米)。该蛋白由606个氨基酸残基组成,以同源二聚体的形式在人体内行使功能。本次解析的结构为生理状态下ABCD4二聚体复合物的结构,包含两个六次...
膜蛋白靶向药开发迎来全新时代,沃臻生物自研突破性MegaR技术已...
“融合标签不会与GPCR的跨膜螺旋形成连续螺旋结构,不改变GPCR跨膜螺旋的天然构象,保持了改造后GPCR蛋白的稳定性,且利于解析构象差异的各种类型的GPCR结构。纯化过程中加入的另外两个蛋白与这个30个氨基酸的标签形成紧密的复合体,并从两侧把它包裹在中间。通过调节标签与GPCR之间连接肽段的长度,可以使这两个蛋白与GPCR...
科学家揭示关键线粒体蛋白结构,助推线粒体相关的人类疾病研究
第一阶段,在体外分离和纯化DELE1。由于该蛋白的疏水性非常高,在体外的稳定性又特别低,因此很难被很好地表达和纯化出来。课题组成员尝试了多种方法,最终选择用一个稳定的蛋白和DELE1进行连接,才得以克服困难。第二阶段,进行结构解析。为了进一步提高蛋白分辨率,获得更为清晰的结构,该团队不仅采用在样品包裹...
中美科研团队获得迄今为止最清晰的线粒体蛋白解析图像
从南京中医药大学获悉,该校朱家鹏教授与美国耶鲁大学张凯教授联合团队当天在国际学术期刊《自然》发表研究成果。团队突破“蛋白质纯化”这一传统概念,直接对线粒体成像,获得了迄今为止最清晰、最接近真实生理状态的线粒体原位膜蛋白高分辨率三维解析结构。(新华社)...