...兽医师等:基于行业标准中马和驴成分检测方法用于骡肉检测的分析
使用SN/T3730.4—2013和SN/T3730.5—2013中的引物分别对9份样品中的马、驴成分进行PCR扩增测序,对测序结果进行分析。如图1B所示,马、驴特异性的real-timePCR方法中的引物在普通PCR反应中对9份样品均有扩增,将SN/T3730.5—2013中马成分的引物对样品1、样品4和样品7~9的PCR扩增产物分别命名为马-H1、马...
“阴差样错”了,怎么剖新析“肝”?
实时荧光PCR通常包括基线期﹑指数期﹑线性期﹑平台期四个时期,前两次检测因扩增反应曲线没有基线期,PCR仪判读为无效扩增曲线,无法计算阈值(设定为基线期荧光强度标准差的10倍)、CT值(每个反应管的荧光强度达到阈值所经历的循环数),因此没有CT值,导致结果为假阴性。核酸提取效率的差异性或实验本身误差,样本反复冻融...
揭开“内标”未出之谜|pcr|内标|扩增|核酸|荧光|试剂_手机网易网
本次实验之所以会认为内标基因未出,和我们分子室日常工作习惯也很有关系,一般情况下我们观察的曲线为仪器数据优化处理后的扩增曲线,而非原始荧光曲线。优化处理后的扩增曲线为PCR扩增仪对实时监测到荧光信号进行平滑处理、去除噪声和异常值等操作,通过对这些数据优化处理,可以使得扩增曲线更加平滑、清晰,更容易进行分析和...
qPCR 曲线「丑」到拿不出手!除了引物,这些问题也要注意
引物设计跨内含子(防止非特异性扩增),注意不同转录本之间的差异,扩增效率在90~110%之间,引物特异性验证(Primer-Blast序列比对及溶解曲线分析);2.CT值异常分析:Ct值过大:可能是模板浓度低,扩增效率低或者体系存在PCR抑制物。应注意提高模板浓度,降低退火温度等优化反应程序。Ct值过低:可能是模板...
PCR异常扩增曲线案例分析与解决办法盘点!
标本包括内源性内标不出现明显的扩增曲线。2分析:标本采集时是否有采到样;进行核酸提取时是否漏加或是因为试剂问题提取不成功。3解决:重新采样检测或是重新进行核酸提取。案例21问题:PCR两个靶基因的扩增曲线呈斜直线型。2分析:出现此种情况可以注意下检测完的反应管里面该孔位的标本是否出现反...
收藏!PCR异常扩增曲线分析攻略
对于荧光定量PCR的结果的判断,最直观的判断就是看扩增曲线是否正常(www.e993.com)2024年10月23日。很多老师在平时实验中会遇到异常扩增曲线的困扰,比如打折的扩增曲线、复孔间重复性不好、阴性样本扩增曲线抬升等。面对异常的扩增曲线,大家也不用担心,接下来我们会结合几个实例,带着大家一起来看一下比较常见的异常扩增曲线的分析攻略。
大规模新冠核酸筛查中出现的异常扩增曲线分析
扩增曲线呈现为V型或是倒V形状,多见于PCR反应板四周边缘孔位。02原因分析:该类型曲线反应孔多数会出现液面偏低情况,甚至该孔无液体(上机前检查液面正常)。可能是PCR反应板封板膜未盖严,或加热变形,膜上翘导致液面蒸发。03解决方案:建议采用质量好、加热不易变形的封板膜;核酸加样后用力压实封好反应板...
PCR实验室常见问题及异常结果分析!
1、首先我们看一下PCR正常扩增曲线,是比较平滑的S型曲线,见下图:2、常见异常结果分析2.1案例12.1.1现象:常见单基因翘尾且出现较大的Ct值和单基因翘尾无Ct值现象,见下图:2.1.2常见原因:阴性质控曲线翘尾,存在阳性质控或阳性标本污染;样本曲线翘尾,表示目的基因浓度低或者存在非特异性扩增或者存在污染。
一文揽尽:荧光定量PCR扩增曲线哪个阶段最重要
如图所示,标准的扩增曲线是呈现S型的。曲线是否符合标准,不仅跟样本起始量、qPCR体系配制、反应程序等相关,更依赖于一套高品质的实时荧光定量PCR系统。对于实时荧光定量PCR系统来说,高度检测灵敏度、高度重复性和高度稳定性,是每一台qPCR仪的追求。高性能的AzureCielo??实时荧光定量PCR系统完全符合以上要求,该系统...
PCR实验连续失控!原因竟是这个...
实验的有效性是要求弱阳性质控品在靶基因(ORF1ab、N、E)所在的通道有扩增曲线,并且CT值的上限是在扩增试剂的有效判读范围内,下限是试剂灵敏度的1.5-3倍,内参RNaseP所处通道无扩增曲线(建议使用);阴性质控品靶基因及内参通道无扩增曲线[2]。对于每个检验者来说,最担心的莫过于出现室内质控失控,这不仅说明本次...