师弟一举赢得 qPCR 「最美」曲线,暗藏哪些小心机?
1.熔解曲线出现杂峰:1)杂峰在主峰之前,说明存在引物二聚体,建议需要重新设计引物。2)杂峰在主峰之后,大多由非特异性扩增引起,建议调整稀释倍数、减少引物。2.扩增曲线抖动,不光滑或没有平台期可能因为仪器不准或模板不纯。建议进行仪器校准;增大模板稀释倍数。3.实验重复性差1)样本问题:每次实验尽量...
qPCR 曲线「丑」到拿不出手!除了引物,这些问题也要注意
CT值重复性差:仪器、试剂、耗材、实验操作细节等众多因素,具体问题具体分析。3.qPCR扩增曲线异常:正常扩增曲线应呈平滑S型。常见异常包括扩增曲线锯齿状(RNA浓度低或体系含有杂质);无法到达平台期(模板浓度太低,循环数太少或扩增效率低);除了CT值、扩增曲线异常,我们还常遇到RNA降解、引物特异性...
精准医疗视角下的NSCLC:MET基因扩增检测优化策略
而NGS技术虽然提供了多基因并行检测的能力,减少了人工干预,但不同实验室和商业检测在NGSpanel设计、数据分析策略及MET基因扩增cut-off值设定上存在差异,进一步加剧了检测结果的不一致性。一项MET基因扩增的大型荟萃分析显示4:当前临床试验中MET基因扩增的定义各不相同,MET/CEP7的比值范围从≥1.8到≥3.0(图2)。图...
国产PCR核酸扩增仪10月热度榜(下),采购必备
Cepheid??GeneXpert??DxSystem全自动医用PCR分析系统(GX-IVR2)是全自动一体化的核酸检测系统,可搭载1-4个独立的反应模块,采用非常经典的荧光定量PCR(qPCR)技术和微流控技术,将繁琐的核酸检测过程精简为“样本进,结果出”的简单操作,同时又保证了专业实验室水准的检测性能,定义了非专业场景下开展核酸检测的...
qPCR 曲线杂乱、重复性差?你可能忽略了这些点(含福利)
引物设计跨内含子(防止非特异性扩增),注意不同转录本之间的差异,扩增效率在90~110%之间,引物特异性验证(Primer-Blast序列比对及溶解曲线分析);2.CT值异常分析:Ct值过大:可能是模板浓度低,扩增效率低或者体系存在PCR抑制物。应注意提高模板浓度,降低退火温度等优化反应程序。
揭开“内标”未出之谜|荧光|扩增|试剂|核酸|pcr_网易订阅
图6图7案例分析本次案例由检测样本内标Ct值和扩增曲线未出而对结果的准确性产生怀疑,经过对标本、试剂、操作、仪器等因素的排除,然后查看原始荧光曲线,发现端倪,最后在仪器软件工程师的协助下,查出内标未出为仪器设置的原因,在工程师指导下对仪器“噪音容限”进行重新设置后,最终内标Ct值和扩增曲线得以显现(www.e993.com)2024年8月4日。
上新(可试用) | 样本太多?定量实验太繁琐?全新一步法RT-qPCR试剂...
如图2,选择三个不同GC含量体系以及1个非特异体系,在相同条件下,分别用Q226与市面其他品牌的同类产品SupplierA试剂进行RT-qPCR扩增。测试结果表明,Vazyme#Q226灵敏度更优,且在非特异性体系上,熔解曲线呈单峰,特异性高,优于SupplierA。图2.Q226扩增效果图...
2023十大自主创新医疗器械产品
恒温扩增微流控芯片核酸分析仪博奥生物2015年4月20日,博奥生物集团有限公司自主研发的恒温扩增微流控芯片核酸分析仪获得了国家食品药品监督管理总局(CFDA)的认证,获三类医疗器械注册证书。这款仪器平台完美结合了微流控与恒温扩增技术,能够对核酸分子进行快速、高通量并行处理,大大简化实验流程、提高实验速度,可广泛应...
那么问题来了,qPCR又是什么?
扩增反应结束后,需对生成的双链DNA进行分析:通过升温,dsDNA双链解开,SYBRGreenI染料脱落,荧光值逐渐下降,形成温度和荧光强度的曲线即“熔解曲线(Meltingcurve)”,由此判断体系中是否存在引物二聚体、非特异性扩增。02实验步骤是什么?以相对定量步骤为例...
大规模新冠核酸筛查中出现的异常扩增曲线分析
基线调整后曲线图:01曲线特点:曲线如倾倒的“S”型,呈现先下降再上升后下降的特点,形似光滑的波浪状。02原因分析:仪器的自动基线设定为6-12循环,因样本病毒核酸载量高,扩增曲线起跳早,位于或早于基线循环处,导致曲线异常。03解决方案:该类型曲线需手动调整基线范围,将基线设定前移至合适循环,重新分析...