想成为核酸提取高手?一定要知道这三大要点!

敏感培养细胞的转染要注意使用无内毒素的质粒提取试剂(货号:A31231),内毒素的存在会很大程度上影响转染细胞的存活率,进而导致实验结果不理想。使用无内毒素的质粒提取试剂,可以有效提高转染实验的成功率。大师兄小师弟核酸提取实验总是出问题,说明没有掌握好其中的要点。核酸提取实验作为实验室常用的实验技术,是绝大...

质粒DNA提取及浓度纯度测定

碱裂解法提取质粒是根据共价闭合环状质粒DNA与线性染色体DNA在拓扑学上的差异来分离它们。在pH值介于12.0—12.5这个狭窄的范围内,线性的DNA双螺旋结构解开而被变性,尽管在这样的条件下,共价闭环质粒DNA的氢键会被断裂,但两条互补链彼此相互盘绕,仍会紧密地结合在一起。当加入pH4.8的乙酸钾高盐缓冲液恢复pH至中性时,...

rAAV基因治疗制品申报IND/NDA药学评价要点

目前采用较多的是三质粒共转染HEK293生产工艺,HEK293细胞中含有腺病毒(adenovirus,AdV)的E1a和E1b基因,共转染转移质粒(含目的基因和ITR序列)、结构质粒(含rep/cap基因)和辅助质粒(复制病毒基因E2A,E4,VARNA等),48～72h后即可重组包装rAAV。该方法适用于多种血清型rAAV,发酵产率一般...

核酸提取、纯化与常见问题解答

答:纯净的DNA的A260/A280比率在1.8-2.0之间,如样品中RNA的残留量较多,则会造成A260/A280的比较较高,需要在提取过程中加入RNaseA(如提取过程中按照说明书加入了RNaseA,则要考虑RNase活性降低的可能性)。Q7:血液基因组DNA提取之前的样本处理注意事项?答:(1)人血液中含有大量可能干扰下游DNA分析的酶抑制剂...

创新和发展以服务社会--全国重点高分子材料方向汇总_凤凰网

生产成本比同类产品低50%以上。单壁碳纳米管是强度最高的纤维,长度是衡量其性能的一个极为重要的指标,决定了其宏观导电性、强度以及加工性能,本公司的单壁碳管长度为竞标公司的3-5倍,极大扩展了应用范围,技术工艺比竞标对手领先一代。复合碳纤维轮胎...

创新和发展以服务社会--全国重点高分子材料方向汇总_凤凰网

聚甲基丙烯酰亚胺(PMI)泡沫与普通泡沫材料的最大区别是在同等密度下压缩强度最高的泡沫材料,密度为52kg/m3的PMI泡沫压缩强度达到1.2MPa,同时可以耐220℃高温、普通泡沫使用温度不到120℃;满足碳纤维高温高压复合工艺要求,具有复合工艺优势,是高性能复合夹芯结构件的优选芯材;项目优化产品配方和制备工艺,实现了230...

2022年核酸药行业研究报告(附下载)

1)提取病毒DNA技术人员从细胞库中提取病毒DNA,即含有病毒S蛋白基因的质粒。之后将质粒导入大肠杆菌,质粒会随之进行复制、繁殖,这一过程称之为发酵。发酵长达四天,在此期间大肠杆菌每20分钟就会繁殖一次,并复制数以万亿个病毒DNA质粒。发酵结束后,技术人员会净化这些发酵物,最终仅留下DNA质粒。被提...

qPCR体系优化和常见问题分析

采样是需要严格规划的过程,比如材料的时效性、珍贵程度等,都要纳入考量范围。样品要尽量新鲜,取样尽可能快速。戴手套操作,防止污染。如果不马上提取核酸,需要-80°C保存,并尽快处理。2.核酸的提取和检测模板的质量直接影响到检测性能。核酸提取需要有效地将RNA或DNA从其他混合物中分离。RNA样本中的污染物——基因...

医药行业深度研究:千亿级核酸药物市场即将开启_腾讯新闻

1)提取病毒DNA技术人员从细胞库中提取病毒DNA,即含有病毒S蛋白基因的质粒。之后将质粒导入大肠杆菌,质粒会随之进行复制、繁殖,这一过程称之为发酵。发酵长达四天,在此期间大肠杆菌每20分钟就会繁殖一次,并复制数以万亿个病毒DNA质粒。发酵结束后,技术人员会净化这些发酵物,最终仅留下DNA质粒。

综述:超微量紫外可见分光光度计仪器及应用现状分析

(1)波长(波长范围和波长准确度):因为生物样品中绝大多数吸收峰都在紫外区。例如:亮氨酸吸收峰在230nm左右、核酸的吸收峰在260nm、蛋白的吸收峰在280nm等,所以超微量UVS的波长范围,一定要涵盖紫外区。而超微量UVS一般是直接测量吸光度A,根据比耳定律,A=εbc,即吸光度与摩尔吸光系数ε、光程b和样品浓度c成正比...