和元生物获得发明专利授权:“一种提高大肠杆菌裂解过程中质粒稳定...

具体步骤如下:1)菌体重悬,所述重悬液含二糖类化学物质;2)碱裂解;3)中和;4)澄清;5)浓缩换液;6)分子筛层析;7)制剂换液。本发明的工艺简便,通过在菌体重悬液中添加一定浓度的二糖(如蔗糖、海藻糖等),保护大肠杆菌碱裂解过程中的超螺旋质粒,进而简化下游层析纯化工艺,并提高质粒回收率,方便快捷,适于推广应用。

...安徽工程大学张琴教授等:过表达去饱和酶基因对大肠杆菌脂肪酸...

将重组质粒转化至BL21(DE3)得到工程菌株BL21(DE3)/pET-de1(DE1),BL21(DE3)/pET-de2(DE2)及共表达菌株BL21(DE3)/pET-de(DE),对工程菌株进行PCR检测、质粒及酶切验证,序列比对结果显示工程菌构建成功。3工程菌株DE1、DE2、DE去饱和酶基因诱导表达产物的SDS-PAGE分析对工程菌株DE1、DE2、DE去饱和酶基...

“双非”高校,唯一单位发Nature Sustainability!

工程大肠杆菌细胞的合成和检测作者使用大肠杆菌细胞来进行研究,因为它们含有具有电催化ORR活性的膜间细胞色素c蛋白。为了提高细胞色素c的浓度和细胞外界面电子转移效率,作者采用了基因和纳米工程手段。将含有编码cytc蛋白的torY基因的质粒转入野生型(WT)细胞,以获得工程型(ET)细胞(图1)。在质粒中,强T7启动子导致ET...

mRNA质粒生产策略:线性化质粒生产工艺ProPlus,助力产量提升并缩短...

质粒制备的一般流程是将合成或构建的质粒转入大肠杆菌,通过菌体培养,菌体裂解质粒释放再到质粒纯化并完成质粒检测。质粒的制备涉及多个环节,大规模生产高质量,高性价比的质粒对生物科技公司来说非常具有挑战。其中金斯瑞蓬勃生物专利技术平台LeverDNA??中应用到mRNA质粒生产工艺:ProPlus??工艺,该工艺由金斯瑞蓬勃生物自...

HUST-China战队:大肠杆菌的蜕变—从致病祸首到合成生物学帮手丨...

因此,科学家们便想到了一个解决方法——将其他细菌中的双组分系统改造后移入大肠杆菌使用。这样一来,这个改造后的双组分系统只会影响到转入的目的基因的表达情况,并不会影响大肠杆菌原有的基因表达,也就几乎不会对大肠杆菌原本的生存造成影响。为了让捕获蛋白在需要的时候才进行表达,团队向大肠杆菌中导入了来自沙...

大肠杆菌感受态细胞的几种制备方法protocol

所以,有重组质粒的菌落为白色,而没有重组质粒的菌落为蓝色(www.e993.com)2024年11月19日。大肠杆菌感受态细胞的几种制备方法:方法一:细菌转化的方法多以Mendel和Higa(1970)的发现为基础,其基本方法是用冰预冷CaCl2或多种2价阳离子等处理细菌,使之进入感受态得以转化。用CaCl2制备新鲜或冷冻的大肠杆菌感受态细胞,常用于成批制备感受态细菌。

科研| 中国农大: 中国使用抗菌药物50年来,动物源大肠杆菌耐药基因...

这种减少可能是由以下因素介导的:(1)mcr介导的脂质A部分的靶向修饰是大肠杆菌中粘菌素抗性的唯一可转移机制,(2)mcr-1的表达可对携带含mcr质粒的大肠杆菌施加相当大的适应性成本,(3)禁止粘菌素作为生长促进剂显著降低了mcr-1的选择压力,(4)观察到mcr基因很少与其他ARGs一起出现在相同的可移动遗传元件上,这降低...

照着文献里的方法做实验,竟然失败了

在酶切方式的选择上,除了传统的「柱下酶切(Off-columncleavage)」(将目的蛋白从填料上洗脱下来,再加入酶进行酶切)外,还提供了一种更加简便的酶切形式——柱上酶切(On-columncleavage)。采用柱上酶切的方式时,上样结束后不需要洗脱目的蛋白,使用酶切缓冲液平衡后,向柱子或填料中加入含有特定蛋白酶的溶液开...

猪伪狂犬病毒gB基因在大肠杆菌中的分段表达

1材料和方法1.1毒株与血清伪狂犬病毒毒株为新疆分离株,由中国动物疫病预防控制中心提供。感染伪狂犬病毒的阳性血清、阴性血清、22份猪血清临床样品均为本试验室保存。1.2载体、菌株、试剂pGEM-T-easy、内切酶EcoRI和SalI购自Promega公司。pGEX-6P-1表达载体购自AmershamPharmacia公司。大肠杆菌BL21感受态细胞购自北京...

【陈巍学基因】视频:PACE 噬菌体辅助基因连续进化方法

这是一种用噬菌体为基因载体,来对特定基因做持续定向突变的方法。接下来,我们会分“工作原理”和“实用案例”两个部分,对PACE进行讲解。一、工作原理我们先讲工作原理中的实验设计。1.1实验设计PACE实验的最基本原理,中间的这个是一个大肠杆菌和噬菌体培养瓶,里面有培养着大肠杆菌和我们要进行筛选的噬...