和元生物获得发明专利授权:“一种提高大肠杆菌裂解过程中质粒稳定...

具体步骤如下:1)菌体重悬,所述重悬液含二糖类化学物质;2)碱裂解;3)中和;4)澄清;5)浓缩换液;6)分子筛层析;7)制剂换液。本发明的工艺简便,通过在菌体重悬液中添加一定浓度的二糖(如蔗糖、海藻糖等),保护大肠杆菌碱裂解过程中的超螺旋质粒,进而简化下游层析纯化工艺,并提高质粒回收率,方便快捷,适于推广应用。

颠覆大肠杆菌地位?创新微生物引领合成生物实验新潮流

为了生成大量的蛋白质变体以供测试,研究者经常将这些质粒导入大肠杆菌细胞内,促使其复制出感兴趣蛋白质。然而,这种方法存在一个明显的短板:那些携带质粒载体的大肠杆菌,特别是那些经过改良的实验菌株,它们的生存能力相对较弱。而且,如果没有适当的压力维持(例如抗生素),质粒会随着时间的推移逐渐丢失,这无疑给菌株的维...

一个划时代的里程碑

而mRNA的生产方式目前则更加适合大规模生产:直接将批量将病毒DNA转进质粒中,将质粒导入大肠杆菌,然后培养扩增大肠杆菌,只需要四天的培养发酵,然后就可以分解大肠杆菌,分离纯化获得DNA,然后再经过人工转录的过程,将DNA变成RNA,转录的过程只需要数小时。最后也是非常关键的技术壁垒:将mRNA加入与脂质纳米粒(LNP)结合,使其...

mRNA疫苗的发展历程与作用机制

利用电流打破细胞膜,并将环状DNA质粒引入大肠杆菌。此后,大肠杆菌被储藏于含有大量营养物质的溶液中进行繁殖扩增。大肠杆菌每20分钟分裂一次,4天内可以得到数万亿DNA质粒。提取并纯化DNA质粒,过滤溶液,去除细菌及其他物质。利用酶将纯化后的环状DNA质粒切割为链状。将所得溶液分装冷藏,通过质量控制环节,并运送至下一...

mRNA疫苗超全知识汇总,看这一篇就够了!

作用机制:通过将含有编码抗原蛋白的mRNA导入人体,可以跳过复制、转录过程,直接进行翻译,形成相应的抗原蛋白,从而诱导机体产生特异性免疫应答,达到预防免疫的作用。以新型冠状病毒mRNA疫苗作用原理为例:刺突糖蛋白(S蛋白)是新冠病毒入侵人体的关键蛋白,这种蛋白可以识别人类呼吸道上皮细胞上的ACE2蛋白,并与之相互作用,...

“双非”高校,唯一单位发Nature Sustainability!|活性|催化剂|...

作者使用大肠杆菌细胞来进行研究,因为它们含有具有电催化ORR活性的膜间细胞色素c蛋白(www.e993.com)2024年11月19日。为了提高细胞色素c的浓度和细胞外界面电子转移效率,作者采用了基因和纳米工程手段。将含有编码cytc蛋白的torY基因的质粒转入野生型(WT)细胞,以获得工程型(ET)细胞(图1)。在质粒中,强T7启动子导致ET细胞中的cytc转录和翻译率高...

中国农大团队提出高效从头合成HMO新策略,无副产物3-FL产生

首先，为了在大肠杆菌中通过从头合成途径生成2'-FL，该团队删除β-半乳糖苷酶基因lacZ生成菌株BZ，并将质粒pET-BCGIC导入菌株BZ中构建菌株BSF01，然后删除wcaJ基因构建菌株BSF02。通过一系列试验发现缺失lacZ和wcaJ基因是合成2′-FL的第一步，删除这两个基因后合成2'-FL的产量达到...

大肠杆菌感受态细胞的几种制备方法protocol

所以,有重组质粒的菌落为白色,而没有重组质粒的菌落为蓝色。大肠杆菌感受态细胞的几种制备方法:方法一:细菌转化的方法多以Mendel和Higa(1970)的发现为基础,其基本方法是用冰预冷CaCl2或多种2价阳离子等处理细菌,使之进入感受态得以转化。用CaCl2制备新鲜或冷冻的大肠杆菌感受态细胞,常用于成批制备感受态细菌。

基因治疗中质粒DNA的质量控制

基因治疗是将外源基因导入人体以纠正基因缺陷的方法,通过转录和翻译实现对细胞基因表达的调控,从而合成特异性蛋白治疗相关疾病。质粒DNA(PlasmidDNA,pDNA)是自然存在于细菌中的环状DNA分子。其结构简单、具有自主复制能力、可以携带治疗基因,这些特性使其非常适合作为基因工程的载体。经基因工程改造过的pDNA,经过大量生...

专注清洁基因组大肠杆菌生产,Scarab已开发17款产品涉足四大应用...

Scarab通过删除超过15%的K-12基因组,对大肠杆菌进行生物工程改造。使用合成生物学方法,进行精确的删除,包括消除不必要的基因、重组和可移动的DNA以及隐性的有毒基因,优化大肠杆菌菌株的生产,提供遗传稳定性更强、代谢效率更优的大肠杆菌。与传统的常用大肠杆菌相比,清洁基因组大肠杆菌菌株在实验室克隆,质粒DNA产生和重...